背景知識 ：
細胞培養的傳代及日常維持過程中，在培養器具、培養液及各種準備工作方面都需大量的耗費，而且細胞一旦離開活體開始原代培養，它的各種生物特*都將逐漸發生變化並隨著傳代次數的增加和體外環境條件的變化而不斷有新的變化。因此及時進行細胞凍存十分必要。細胞冷凍儲存在-70℃冰箱中可以儲存一年之久；細胞儲存在液氮中，溫度達-196℃，理論上儲存時間是無限的。
原理 ：
細胞凍存及復甦的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以最大限度的儲存細胞活力。目前細胞凍存多採用甘油或二甲基亞碸作保護劑，這兩種物質能提高細胞膜對水的通透*，加上緩慢冷凍可使細胞內的水分滲出細胞外，減少細胞內冰晶的形成，從而減少由於冰晶形成造成的細胞損傷。復甦細胞應採用快速融化的方法，這樣可以保證細胞外結晶在很短的時間內即融化，避免由於緩慢融化使水分滲入細胞內形成胞內再結晶對細胞造成損傷。
主體內容（操作步驟）：
一、材料
（一）儀器
1. 淨化工作台
2. 離心機
3. 恆溫水浴箱
4. 冰箱（4℃、-20℃、-70℃）
5. 倒置相差顯微鏡
6. 培養箱
7. 液氮冰箱
（二）玻璃器皿
1. 吸管（彎頭、直頭）
2. 培養瓶
3. 玻璃瓶（250ml、100ml）
4. 廢液缸
（三）塑料器皿
1. 吸頭
2. 槍頭
3. 膠塞
4. 移液管（10ml）
5. 15ml離心管
6. 凍存管（1～2ml）
（四）其他物品
1. 微量加樣槍
2. 紅血球計數板
3. 記號筆
4. 醫用橡皮膏
5. 移液槍
（五）試劑
1. d-hanks液
2. 小牛血清
3. 培養液
4. 雙抗（青黴素、鏈黴素）
5. 胰蛋白酶（0.08%）
6. 1nhcl
7. 7.4%nahco3
8. dmso（分析純）或無色新鮮甘油
四、操作步驟
（一）細胞凍存
1. 配製含10%dmso或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養液；
2. 取對數生長期的細胞，用胰蛋白酶把單層生長的細胞消化下來，懸浮生長的細胞則直接將細胞移至15ml離心管中、；
3. 離心1000rpm，5min；
4. 去除胰蛋白酶及舊的培養液，加入適量配製好的凍存培養液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數，調節凍存液中細胞的最終密度為5×106/ml～1×107/ml；
5. 將細胞分裝入凍存管中，每管1～1.5 ml；
6. 在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者；
7. 凍存：標準的凍存程式為降溫速率-1～-2℃/ min；當溫度達-25℃以下時，可增至-5℃～-10℃/ min；到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。
也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ，然後放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內。
（二） 細胞復甦
1. 從液氮容器中取出凍存管，直接浸入37℃溫水中，並不時搖動令其盡快融化。
2. 從37℃水浴中取出凍存管，開啟蓋子，用吸管吸出細胞懸液，加到離心管並滴加10倍以上培養液，混勻；
3. 離心， 1000rpm，5min；
4. 棄去上清液，加入含10%小牛血清培養液重懸細胞，計數，調整細胞密度，接種培養瓶，37℃培養箱靜置培養；
5. 次日更換一次培養液，繼續培養。
五、注意事項
1．從增殖期到形成緻密的單層細胞以前的培養細胞都可以用於凍存，但最好為對數生長期細胞。在凍存前一天最好換一次培養液；
2．將凍存管放入液氮容器或從中取出時，要做好防護工作，以免凍傷；
3．凍存和復甦最好用新配製的培養液。
細胞凍存與細胞復甦標準操作規程 SOP
背景知識 細胞培養的傳代及日常維持過程中，在培養器具 培養液及各種準備工作方面都需大量的耗費，而且細胞一旦離開活體開始原代培養，它的各種生物特性都將逐漸發生變化並隨著傳代次數的增加和體外環境條件的變化而不斷有新的變化。因此及時進行細胞凍存十分必要。細胞冷凍儲存在 70 冰箱中可以儲存一年之久 細胞儲...
細胞傳代培養標準操作規程
細胞傳代培養 消化法 標準操作規程 一 原理 細胞在培養瓶長成緻密單層後，已基本上飽和，為使細胞能繼續生長，同時也將細胞數量擴大，就必須進行傳代 再培養 傳代培養也是一種將細胞種儲存下去的方法。同時也是利用培養細胞進行各種實驗的必經過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以，而貼壁細胞需經消化後才能分瓶。二 材...
293T細胞培養標準操作規程
百利藥業生物藥研發部 標準操作規程 題目 293t細胞傳代培養操作規程 編號 sop m e 003 制定者簽名 日期 年月日 批准者簽名 日期 年月日 生效日期年月日 修改和追加記錄 題目 293t細胞培養操作規程 1 目的 293t細胞是常用於包裝和擴增病毒載體的工具細胞，因此做好293t細胞的...