厭氧微生物在自然界分布廣泛，種類繁多，其生理作用日益受到人們的重視。雙歧桿菌是專性厭氧菌，對氧氣非常敏感，因此，雙歧桿菌的分離、培養及活菌計數的關鍵是提供無氧和低氧化還原電勢的培養環境。
雙歧桿菌的最適生長溫度37℃~41℃，最低生長溫度25℃~28℃，最高43℃~45℃。初始最適ph 6.5~7.0，在ph4.5~5.0或ph
8.0~8.5不生長。
其細胞呈現多樣形態，有短桿較規則形、纖細桿狀具有尖細末端形、球形、長桿彎曲形、分枝或分叉形、棍棒狀或匙形。單個或鏈狀、v形、柵欄狀排列，或聚集成星狀。革蘭氏陽性，不抗酸，不形成芽孢，不運動。
雙歧桿菌的菌落光滑、凸圓、邊緣完整、乳脂至白色、閃光並具有柔軟的質地。雙歧桿菌是人體內的正常生理性細菌，定殖於腸道內，是腸道的優勢菌群，佔嬰兒消化道菌叢的92%。該菌與人體終生相伴，其數量的多少與人體健康密切相關，是目前公認的一類對機體健康有促進作用的代表性有益菌。
該菌可以在腸粘膜表面形成乙個生理性屏障，從而抵禦傷寒沙門氏菌、致瀉性大腸桿菌，痢疾致賀氏菌等病原菌的侵襲，保持機體腸道內正常的微生態平衡；能啟用巨噬細胞的活性，增強機體細胞的免疫力；能合成b族維生素、菸酸和葉酸等多種維生素；能控制內毒素血症和防治便秘，預防貧血和佝僂病；可降低亞硝胺等致癌物前體的形成，有防癌和抗癌作用；能拮抗自由基、羥自由基及脂質過氧化，具有抗衰老功能。
雙歧桿菌的培養方法很多，如厭氧箱法、厭氧袋法、厭氧罐法。這些方法都需要特定的除氧措施，操作步驟多，較繁瑣。本實驗介紹的是一種簡便的試管培養法——亨蓋特厭氧滾管技術，。
以後這項技術又經歷了幾十年的不斷改進，從而使亨蓋特厭氧技術日趨完善，並逐漸發展成為研究厭氧微生物的一套完整技術，而且多年來的實踐已經證明它是研究嚴格、專性厭氧菌的一種極為有效的技術。該技術的優點是：預還原培養基製好後，可隨時取用進行試驗；任何時間觀察或檢查試管內的菌都不會干擾厭氧條件。
目前，雙歧桿菌鑑定的方法有很多種。近年來興起的一種新的rapd等分子生物學技術對雙歧桿菌進行基因指紋圖譜的構建，分析不同雙歧桿菌種間存在的同源性和多型性；rapd技術也可用於雙歧桿菌菌種鑑定及分型。一般來講，我們都應用適合鑑定所有厭氧菌的方法，主要包括雙歧桿菌特定酶的檢測、乙酸、乳酸等有機酸的測定、糖發酵試驗和其他相關指標等。
實驗用具
高純氮氣厭氧管注射器培養箱冰塊水浴鍋鑷子記號筆 mrs培養基細菌生化微量鑑定管酒精棉球瓷盤振盪器銅柱除氧系統定量加樣器
恆溫水浴載玻片顯微鏡恆溫培養箱超聲波破碎儀濾紙層析缸酒精燈封口膜厭氧罐等。
實驗方法與步驟
1銅柱系統除氧
銅柱是乙個內部裝有銅絲或銅屑的硬質玻璃管。此管的大小為40～400mm，兩端被加工成漏斗狀，外壁繞有加熱帶，並與變壓器相連來控制電壓和穩定銅柱的溫度。銅柱兩端連線膠管，一端連線氣鋼瓶，另一端連線出氣管口。
由於從氣鋼瓶出來的氣體如n2、co2和h2等都含有微量o2，故當這些氣體通過溫度約360℃的銅柱時，銅和氣體中的微量o2化合生成cuo，銅柱則由明亮的黃色變為黑色。當向氧化狀的銅柱通入h2時，h2與cuo中的氧就結合形成h2o，而cuo又被還原成了銅，銅柱則又呈現明亮的黃色。此銅柱可以反覆的使用，並不斷起到除氧的目的。
當然h2源也可以由氫氣發生器產生。
2預還原培養基及稀釋液的製備
製作預還原培養基及稀釋液時，先將配置好的培養基和稀釋液煮沸驅氧，而後用半定量加樣器趁熱分裝到螺口厭氧試管中，一般瓊脂培養基裝4.5～5.0ml，稀釋液裝9ml，並插入通n2氣的長針頭以排除o2。
此時可以清楚的看到培養基內加入的氧化還原指示劑—刃天青由藍到紅最後變成無色，說明試管內已成為無氧狀態，然後蓋上螺口的丁烯膠塞及螺蓋，滅菌備用。
3分離（1）編號
取五支無菌水試管，分別用記號筆標明10-1、10-2……10-5。
（2）稀釋
在無菌條件下，用無菌注射器吸取1ml混合均勻的液體樣品，加入裝有預還原生理鹽水的厭氧試管中，用**器將其混合均勻，製成10-1稀釋液。用無菌注射器吸取1ml10-1稀釋液至另一裝有9ml生理鹽水的厭氧試管中，製成10-2稀釋液。依此進行10倍系列稀釋，至10-7，製成不同樣品稀釋液。
通常選10-5、10-6、10-7三個稀釋度進行滾管計數。
（3）滾管分離
1）滾管
將無氧無菌的瓊脂培養基在沸水浴中溶化，置46-50℃恆溫的水浴中，待用，用無菌注射器吸取10-4、10-5、10-6三個稀釋度各0
.1ml，分別注入待用的試管中，然後將其平放於盛有冰水的瓷盤中迅速滾動，帶菌的溶化瓊脂在試管內壁會即刻形成凝固層。
2）分離
生成的菌落需挑取出來，鏡檢其形態及純度。如尚未獲得純培養物，需再次稀釋滾管，並再次挑取菌落，直至獲得純培養物為止。待挑取的單菌落預先在放大鏡下觀察確定，做好標記。
然後將培養基試管固定於適當的支架上，開啟試管膠塞，同時迅速將氣流適當、火焰滅過菌的氮氣長針頭插入管內。同時，另一液體厭氧管去掉膠塞插入另一滅過菌的通氣針頭。將準備好的彎頭毛細管小心插入固體培養基內，找準待挑菌落，輕輕吸取，轉移至液體試管內，加塞。
37℃培養。培養24h或待培養液混濁後檢查已分離培養物的純度。
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