總結方案保加利亞桿菌的篩選和酸奶的製備

2022-05-25 01:45:06 字數 2328 閱讀 9074

【摘要】:目的:利用一種本組純化出來的乳酸菌製備酸奶。

方法:從市售酸奶中在含碳酸鈣的mrs培養基中挑選有溶菌圈的菌株,從而篩選出保加利亞乳桿菌,利用此菌株利發酵脫脂牛奶中的乳糖產生乳酸,乳酸使牛奶中的酪蛋白變性凝固而使整個奶液呈凝乳狀態。結論:

獲得保加利亞桿菌菌株,成功製備出酸奶。

【關鍵詞】:保加利亞桿菌、酸奶、篩選

【正文】:

酸奶是以新鮮的牛奶為原料,經過巴氏殺菌後再向牛奶中新增乳酸菌(保加利亞桿菌),經發酵後,再冷卻灌裝的一種牛奶製品。

實驗思路:市售酸奶中純化出保加利亞桿菌保加利亞桿菌製備酸奶

實驗原理:利用一些產酸菌在含碳酸鈣的培養基上產生碳酸鈣溶解圈,從而篩選出保加利亞乳桿菌。再利用篩選出的保加利亞桿菌發酵牛奶中的乳糖產生乳酸,乳酸使牛奶中的酪蛋白變性凝固而使整個奶液呈凝乳狀態,即:

酸奶。1、材料和方法

材料:酸奶一袋、平板、試管、 棉籤、蛋白腖10g、牛肉膏10g、酵母膏5g、檸檬酸氫二銨2g、葡糖糖20g、吐溫-80 1ml、乙酸鈉5g、磷酸氫二鉀2g、硫酸鎂0.58g、硫酸錳0.

25g、瓊脂18g、蒸餾水、碳酸鈣、市售牛奶。

實驗步驟:

一、保加利亞桿菌的純化

1.培養基配製:稱取各種試劑:

蛋白腖10g、牛肉膏10g、酵母膏5g、檸檬酸氫二銨2g、葡糖糖20g、吐溫-80 1ml、乙酸鈉5g、磷酸氫二鉀2g、硫酸鎂0.58g、硫酸錳0.25g、瓊脂18g、蒸餾水1000ml、ph6.

5。當mrs培養基冷卻至45°c左右,加入已滅菌的碳酸鈣,充分混勻,到平板。培養溫度42°c,需氧情況:

兼性厭氧。

2. 樣品處理梯度稀釋至10-7 選擇適合的稀釋度分別塗佈於準備好的培養基中,42°c培養48h 挑選產生溶鈣圈的菌落反覆在mrs培養基上劃線挑起單菌落染色,經鏡檢確認為純種挑選革蘭氏陽性單菌落(塗片乾燥固定草酸銨結晶紫染色1min 水洗路哥氏碘液媒染1min 水洗 95%乙醇脫色30s 水洗番紅復染1min 水洗乾燥鏡檢)

3.若鏡檢結果不理想,即:不止是含有桿菌,還有球菌。則繼續純化培養:將所長菌落挑取劃線繼續培養,再鏡檢,直到出現的單菌落只有桿菌為止。

4.試管穿刺4°c冰箱儲存

二、酸奶的製備

1.將脫脂乳液分裝試管和三角瓶,裝量:10ml\管;250ml三角瓶,裝150ml。高壓鍋滅菌115°c,15min。

2.將保藏的菌種接入脫脂乳試管中活化2-3次,至凝固良好時,轉接入三角瓶中(做成母發酵劑)接種量1%-2%左右。(42°c-45°c下培養12h)

3.將發酵培養基滅菌:80°c-90°c保持5-8min即可殺死病原菌和其他微生物。

4.接種:將消毒後的牛奶迅速降溫至45°c以下,接入發酵劑的量為原料乳量的1%-3%。

5.分裝、封口、發酵:接種後,分裝於消毒酸奶瓶或其他容量瓶中,加蓋或封口後放入培養箱3-6h。

6.冷卻後熟:盡檢查酸奶已達到凝固狀態(ph達到4.2-4.3時),取出置於2-5°c條件下冷藏24h。

2、結果:

1.第一次篩菌失敗(未長出保加利亞桿菌)

分析失敗原因:(1)上述篩選保加利亞桿菌步驟一,稀釋濃度過低(一次稀釋10倍),以至於菌含量過少,不易長出。

(2)由於保加利亞桿菌是厭氧菌,而我們第一次篩菌培養時的厭氧環境沒***。(未用封口膜封閉,而且單獨用封口膜也不行,中途出現爛膠的現象,出現爛洞。)

2.第二次實驗成功:

(1)接種菌後的第三天觀察長出白色圓形菌落(如下圖)

(2)挑菌,革蘭氏染色,拍照(如下圖)

(3)繼續純化培養,獲得一種菌株。(如下圖)

(4)挑菌革蘭氏染色,拍照,證明獲得的這種菌株是保加利亞桿菌。(如下圖)

(5)挑菌於脫脂牛奶中,24h後,酸奶製備成功,拍照(如下圖)

3、討論:

在第一次試驗中,出現未長菌的現象,分析失敗原因:(1)上述篩選保加利亞桿菌步驟一,稀釋濃度過低(一次稀釋10倍),以至於菌含量過少,不易長出。(2)由於保加利亞桿菌是厭氧菌,而我們第一次篩菌培養時的厭氧環境沒***。

(未用封口膜封閉,而且單獨用封口膜也不行,中途出現爛膠的現象,出現爛洞。)因此,在第二次試驗中,我們直接用的酸奶的原液進行划板,挑菌。在塗板的同時,用酒精燈外焰快速過一下,消耗部分平板內的氧氣。

使用封口膠封口,並用保鮮膜在外進行包裹,做好裝進一次性手套內,做好厭氧環境。

實驗中最好注意到一下幾點:

1. 實驗過程中要注意器材、培養基的滅菌。

2. 實驗過程中要注意製造保加利亞桿菌的培養環境(厭氧環境)。

3. 革蘭氏染色應注意,各個試劑染色的時間,不宜染色過深。

4. 酸奶的製作過程應注意製造密閉環境,封閉好錐形瓶。

日常生活中,我們可以更加簡單的製備出酸奶,並通過新增各種新增劑,增加其風味。

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