[關鍵詞] 菌種；培養基儲存法；儲存；使用
菌種儲存對於臨床微生物有這十分重要的意義。細菌實驗室除了長期留存日常監測用的標準菌株外，通常也會儲存一些有意義的菌種，對於儲存和使用生物學性狀的穩定性不發生改變的菌種，質量是關鍵。那麼，菌種應如何儲存和使用，本人將工作中的一些經驗和體會總結如下
1.實驗室應建立完善的菌種保管和使用制度
1.1菌種的管理應由專人負責，並且最好有兩人共同進行保管，同時，科室負責人應經常進行監督檢查。
1.2菌種應儲存在安全的地方，所用冰箱或儲物櫃應加鎖，並設雙人雙鎖。
1.3菌種的儲存、使用、傳代、轉移、銷毀等處理都應嚴格按照有關規定進行操作，並有完整的記錄。
1.4菌種應定期進行轉種傳代，並且轉種數代後應作一次生化、血清學鑑定。
2.一般的細菌實驗室儲存菌種有5大類
2.1致病性球菌，如金黃色葡萄球菌、乙型溶血性鏈球菌等；
2.2腸桿菌科的細菌，如病源性大腸埃希菌、沙門菌、志賀菌等；
2.3弧菌科的細菌，如副溶血性弧菌、非o1/o139群霍亂弧菌等；
2.4革蘭陽性桿菌，如蠟樣芽胞桿菌等；
2.5非發酵菌，如銅綠假單胞菌等。
3.菌種儲存的方法
菌種儲存的方法包括培養基儲存法、乾燥儲存法和冷凍乾燥儲存法。以上所介紹的5類菌種，一般都可以用半固體穿刺法儲存，即把要儲存的細菌穿刺接種於瓊脂半固體內，經36℃培養18～24h後，再以無菌手續加入滅菌的液體石蠟油或肉湯，液體高度約為1cm，置4℃儲存。實驗證明，病源性大腸埃希菌、沙門菌、蠟樣芽胞桿菌、枯草桿菌等用此方法儲存3年仍可存活，其它菌種也可儲存數月至半年。
另外，以上各菌種也可用瓊脂固體斜面儲存，但該法儲存時間較短，一般只有一月至數月。另外也可用商品化菌種儲存以及細菌鑑定卡菌種儲存，這兩種方法操作簡單易儲存，但**偏高。
4.菌種的使用
4.1如果是半固體加肉湯儲存的菌種，可以直接取肉湯劃線分離接種在選擇性平板上，36℃培養18～24h後挑取典型菌落作純培養以供使用。
4.2如果是半固體加液體石蠟油儲存的菌種，則需要將液體石蠟油傾去，加入肉湯進行復甦，36℃培養18～24h後，再取肉湯劃線分離接種在選擇性平板上，36℃培養18～24h後挑取典型菌落作純培養以供使用。
5.菌種儲存和使用中應注意的幾個問題
5.1要儲存的菌種最好製備2至3套，2套用瓊脂半固體儲存，一般情況下不使用，只是轉種時才取出來；另一套用瓊脂固體斜面儲存，因其使用方便，專供日常工作使用。
5.2副溶血性弧菌、非o1/o139霍亂弧菌及銅綠假單胞菌等菌種最好在常溫下儲存，而其它菌種則需置4℃儲存。
5.3一些營養要求較高的細菌，如乙型溶血性鏈球菌，則不能用瓊脂半固體儲存的方法儲存，而要用血瓊脂平板（有備件的實驗室可用血瓊脂斜面）儲存，而且需要每個月轉種1次。也可使用商品化菌種儲存法。
5.4對於帶有vi抗原的菌種，如傷寒沙門菌、丙型副傷寒沙門菌則要特別注意。因為vi抗原在普通營養瓊脂經轉種數代後，比較容易丟失。
因而，儲存該類菌種時，最好用瓊脂半固體儲存的同時，再接種一支雞蛋斜面。
5.5細菌經較長時間的儲存後，其形態和生化特性會發生改變，因此，我們在轉種時，應在選擇性平板上挑取較為典型的菌落，並且要適時進行鑑定，以保持菌種原有的生物學特性。
[1]劉運德，微生物學檢驗，北京：人民衛生出版社，2006.
[2]何曉青，衛生防疫細菌檢驗，南昌：新華出版社，1989.
[3]唐珊熙，微生物學及微生物學檢驗，北京：人民衛生出版社，1998.
[4]中國衛生檢驗雜誌，2008，4（18）.
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