一、 油橄欖果渣預處理
（一）油橄欖果渣的脫油
1．有機溶劑浸提法（油橄欖果渣油的提取工藝及其脂肪酸組成研究）
1.1原料、儀器及試劑
原料：油橄欖鮮果渣，用前在-20℃冰箱封存。
儀器：bs210s 型電子分析天平，dhz -c 型大容量恆溫振盪器，n -1001 型旋轉蒸發儀。
試劑：正己烷為分析純試劑; 實驗用水為去離子水。
1.2實驗步驟
準確稱取10 g 粉碎後的油橄欖果渣，置於250ml具塞三角瓶中，按1:9的料液比加入溶劑; 將三角瓶置於55℃（50℃）的恆溫振盪器中振盪提取，轉速200 r /min（150 r /min），時間為3h; 用過濾法分離溶劑混合物與殘渣，用一定量（5+5ml）溶劑洗滌殘渣2 次，收集脫油油橄欖果渣，乾燥至恒重（真空乾燥：40℃，12h），計算脫油率。
2.酶法（酶法輔助提取工藝對橄欖油品質的影響）
2.1原料、儀器及試劑
原料：油橄欖鮮果渣，用前在-20℃冰箱封存。
儀器：bs210s 型電子分析天平，dhz -c 型大容量恆溫振盪器，n -1001 型旋轉蒸發儀、磁力攪拌器（可加熱）、高速離心機。
試劑：纖維素酶; 實驗用水為去離子水。
2.2實驗步驟
準確稱取10 g 粉碎後的油橄欖果渣，置於250 ml具塞三角瓶中，加入1.0%( w/w) 的纖維素酶水溶液10 ml，置於50℃的恆溫振盪器中振盪提取，轉速150 r /min，時間為45min，4 000 r /min 離心20 min，去上層油脂，收集下層脫油的果渣，乾燥至恒重（真空乾燥：40℃，12h），計算脫油率。
（二）油橄欖果渣的乾燥
1.1 原料、儀器及試劑
原料：用上述油橄欖脫油果渣，用前在-20℃冰箱封存。
儀器：bs210s 型電子分析天平，冷凍乾燥機。
1.2 實驗步驟
將原料果渣放入冷凍乾燥機，冷凍乾燥預冷凍時間為24h，在乾燥時間分別為12、24、36、48h的條件下對樣品進行冷凍乾燥處理，對所得樣品進行粉碎，選過80目篩的樣品進行多酚提取操作，以多酚得率為指標確定最適宜乾燥時間。
2.1 原料、儀器及試劑
原料：油橄欖脫油果渣，用前在-20℃冰箱封存。
儀器：bs210s 型電子分析天平，真空乾燥機。
2.2 實驗步驟
2.2.1 乾燥溫度對油橄欖果渣得率的影響
將原料果渣放入真空乾燥機，分別在溫度為30、40、50、60℃條件下對樣品進行真空乾燥處理12h，然後對所得樣品進行粉碎，選過80目篩的樣品進行多酚提取操作，以多酚得率為指標確定最適宜真空乾燥溫度。
2.2.2 乾燥時間對油橄欖果渣得率的影響
將原料果渣放入真空乾燥機，在溫度為40℃，乾燥時間分別為6、12、18、24h條件下對樣品進行真空乾燥處理，然後對所得樣品進行粉碎，選過80目篩的樣品進行多酚提取操作，以多酚得率為指標確定最適宜真空乾燥時間。
根據以上實驗結果，選擇最佳乾燥方式和條件，作為油橄欖果渣乾燥工藝。
原料：用上述乾燥後油橄欖果渣，用前在-20℃冰箱封存。
儀器：bs210s 型電子分析天平，超微粉碎儀，分樣篩（60、80、100、120目）。
將原料果渣放入超微粉碎儀中粉碎一定時間後取出，分別用60、80、100、120目的分樣篩對樣品進行篩分，制得不同粒度的果渣樣品，對這些果渣樣品進行多酚提取操作（乙醇60%，料液比1：30，55℃，2h），以多酚得率為指標確定最適宜的樣品粒度。
二、 油橄欖多酚的提取
（一） 溶劑法提取油橄欖多酚
材料：經上述預處理的油橄欖果渣，用前在-20℃冰箱封存。
儀器：uv—754紫外可見分光光度計(上海分析儀器總廠)，zfq—85a旋轉蒸發器(上海醫械專機廠)，電子天平，高速離心機，100ml容量瓶（磨口）及配套的冷凝管，橡膠管，溫度計、水浴鍋、移液管（5ml、10ml、25ml）、洗耳球、容量瓶（100ml）、酒精比重計。
試劑：乙醇（分析純）、丙酮（分析純）、蒸餾水。
2.1 試驗方法
2.1.1 單因素實驗
(1)浸提溫度比較試驗
精確稱取1.0 g乾燥橄欖粉末4份，分別加入70％乙醇30 ml，分別在30、50、70、90℃（20、35、50、65℃）下浸提2 h，提取2次，離心，收集上清液，定容到100ml。
(2)乙醇濃度比較試驗
精確稱取1.0 g乾燥橄欖粉末4份，分別加入30％、50％、70％、90％乙醇30 ml，50℃下浸提2 h，提取2次，離心，收集上清液，定容到100ml。
(3)料液比比較試驗
精確稱取1.0 g乾燥橄欖粉末4份，分別加入50％乙醇10、20、30、40 ml，50℃下浸提2h，提取2次，離心，收集上清液，定容到100ml。
(4)浸提時間比較試驗
精確稱取1.0 g乾燥橄欖粉末4份，加入50％乙醇30 ml，50℃下分別浸提1、2、3、4h，提取2次，離心，收集上清液，定容到100ml。
(5)提取次數比較試驗
精確稱取1.0 g乾燥橄欖粉末4份，加入50％乙醇30 ml，50℃下浸提2 h，分別提取1次、2次、3次、4次，離心，收集上清液，定容到100ml。
以上各處理均重複3次。
2.1.2 優化實驗
根據單因素試驗與分析結果，選擇有現實作業意義的因素水平構建正交試驗表進行主因素優化試驗，並進行統計分析，得出最佳實驗組合。
3.1 試驗方法
3.1.1 單因素實驗
(1)浸提溫度比較試驗
精確稱取1.0g乾燥橄欖粉末4份，分別加入70％ 丙酮30 ml，分別在20、3o、50、70℃（20、35、50、65℃）下浸提2 h，提取2次，離心，收集上清液，定容到100ml。
(2)丙酮濃度比較試驗
精確稱取1.0g乾燥橄欖粉末4份，分別加入50％、60％、70％、80％丙酮30 ml，50℃下浸提2 h，提取2次，離心，收集上清液，定容到100ml。
(3)料液比比較試驗
精確稱取1.0g乾燥橄欖粉末4份，分別加入50％丙酮10、20、30、40 ml，50℃下浸提2h，提取2次，離心，收集上清液，定容到100ml。
(4)浸提時間比較試驗
精確稱取1.0g乾燥橄欖粉末4份，加入50％丙酮30 ml，50 ℃下分別浸提1、2、3、4h，提取2次，離心，收集上清液，定容到100ml。
(5)提取次數比較試驗
精確稱取1.0g 乾燥橄欖粉末4份，加入50％丙酮30 ml，50℃下浸提2 h，分別提取1次、2次、3次、4次，離心，收集上清液，定容到100m l。
以上各處理均重複3次。
3.1.2 優化實驗
根據單因素試驗與分析結果，選擇有現實作業意義的因素水平構建正交試驗表進行主因素優化試驗，並進行統計分析，得出最佳實驗組合。
根據以上實驗結果，選擇最佳提取溶劑和提取工藝，作為超聲波和微波處理法提取油橄欖果渣多酚的輔助提取方法。
（二） 超聲波法提取油橄欖多酚
材料：經上述預處理的油橄欖果渣，用前在-20℃冰箱封存。
儀器：uv—754紫外可見分光光度計(上海分析儀器總廠)， jy88—ⅱ超聲波細胞粉碎機(上海新芝生物技術研究所)。
試劑：蒸餾水、乙醇或丙酮（分析純）
2.1 超聲波功率對油橄欖果渣多酚提取效果的影響
稱取1.0g經上述果渣預處理後的油橄欖果渣粉，按上述溶劑提取法中最佳溶劑和提取方法加入最佳溶劑，分別在功率為60、70、80、90w，提取時間25min的條件下進行油橄欖果渣的提取，根據多酚得率選出最佳的超聲波提取功率。
2.2 超聲波時間對油橄欖果渣多酚提取效果的影響
稱取1.0g經上述果渣預處理後的油橄欖果渣粉，按上述溶劑提取法中最佳溶劑和提取方法加入最佳溶劑，在功率為80w，提取時間分別為15、25、35、45min的條件下進行油橄欖果渣的提取，根據多酚得率選出最佳的超聲波提取時間。
（三） 微波處理法提取橄欖多酚
材料：經上述預處理的油橄欖果渣，用前在-20℃冰箱封存。
儀器：uv—754紫外可見分光光度計(上海分析儀器總廠)， galanz中型機械微波爐(順德格蘭仕電器****)。
試劑：蒸餾水、乙醇或丙酮（分析純）
2.1 微波功率對油橄欖果渣多酚提取效果的影響
稱取1.0g經上述果渣預處理後的油橄欖果渣粉，按上述溶劑提取法中最佳溶劑和提取方法加入最佳溶劑，分別在功率為260、270、280、290w（改為200、400、600、800w），提取時間5s的條件下進行油橄欖果渣的提取，根據多酚得率選出最佳的微波提取功率。
2.2 微波時間對油橄欖果渣多酚提取效果的影響（橄欖中黃酮微波提取工藝研究）
稱取1.0g經上述果渣預處理後的油橄欖果渣粉，按上述溶劑提取法中最佳溶劑和提取方法加入最佳溶劑，在功率為280w，提取時間分別為4、5、6、7s（改為1、5、10、15min）的條件下進行油橄欖果渣的提取，根據多酚得率選出最佳的微波提取時間。
（四）油橄欖果渣多酚提取最優工藝的確定
根據以上實驗結果，以油橄欖果渣多酚得率為指標，確定油橄欖多酚提取的最佳方法以及工藝條件。
三、 油橄欖多酚的分離純化（油橄欖葉中多酚和黃酮的含量分析）
（一）大孔樹脂法
1．樹脂的篩選
通過測定以下型號樹脂lx-1、xad-7、xad-16、ab-8、hpd-200、ls-100的吸附和解析能力確定樹脂。
2．樹脂的動態試驗（橡實殼多酚分離純化、抗氧化劑抑菌的研究（中南林業科技大學鄭菲碩士**））
2.1 吸附動態試驗
（1）ph值對吸附的影響（3、4、5、6、7、8）
（2）上樣量對吸附的影響（1、2、3、4、5bv/h）
（3）動態吸附曲線的繪製
2.2 解析動態試驗
（1）乙醇濃度對洗脫效果的影響（30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%）
（2）洗脫劑的體積對洗脫效果的影響（1、2、3、4、5bv/h）
（3）動態解吸曲線的繪製
取乾燥好的油橄欖果渣30g，採用最佳提取工藝進行提取，將提取液在30℃下旋轉蒸發除去溶劑，**溶劑，濃縮後樣品加水稀釋至100 ml，用石油醚等體積萃取3次，石油醚層濃縮，**石油醚，水層上大孔樹脂柱( 2．0 am×50 cm)進行柱層析。柱層析方法如下：取處理好的250 ml d101大孔樹脂，裝入層析柱內。
樣品溶液慢慢滴人層析柱，漏出液的速度為4 ml/min。用2～3倍柱體積的水淋洗樹脂至流出液呈無色，以洗去其中的多醣等水溶性雜質，再用70％ 的乙醇溶液600 ml緩緩通過樹脂柱，控制其流速，收集洗脫液。30℃下旋轉蒸發除去乙醇，水相冷凍乾燥，得油橄欖葉提取物精製產品，於-20℃下儲存備用，測定多酚的含量。
（稱取1/4、1/5精製產品分別定容至25ml）
油橄欖栽培管理技術
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