(一)原理
超薄切片實際上是樣品的二維切片，不能表達細胞的三維結構，而且在觀察由切片所拍攝的顯微**時，容易造成錯誤的印象。用掃瞄電子顯微鏡(scanning electron microscope,sem)能直接觀察標本表面的三維空間結構，真實地反映各種細胞表面和斷裂面的形貌特徵。其照明源與透射電鏡基本相同，由電子槍發射的電子束經聚光鏡會聚成極細的電子探針，電子探針受掃瞄發生器控制，在樣品表面逐點逐線地掃瞄，樣品被電子轟擊所產生的二次電子被收集、轉換、放大，在電視螢光屏上同步掃瞄成像。
二次電子的發射量與樣品的表面形貌有關，從而在螢光屏上出現表面起伏的樣品的立體影象。掃瞄電鏡細胞樣品的預處理包括取材、固定、脫水等。
(二)基本步驟
(1)取材一般原則與超薄切片相似，但用於掃瞄電鏡觀察的樣品塊略大，通常為5×8mm左右。
(2)固定鋪片培養的細胞取出浸入pbs中，漂洗細胞表面。然後將細胞鋪片放入青黴素小瓶中，加4℃預冷的3% 戊二醛，在4℃固定2小時或過夜，吸出固定劑，用pbs浸洗2次，每次10分鐘，再用4℃預冷的1% 鋨酸，在4℃固定1小時，然後用pbs浸洗2次，每次10分鐘。
(3)脫水丙酮/醋酸異戊酯(1:1)10分鐘，接下來醋酸異戊酯30分鐘，或用系列梯度酒精(30%、50%、70%、80%、90%、95%和100%)脫水，每種濃度酒精通過2次，每次15分鐘。
(4)乾燥以臨界乾燥法最理想，但必需要有專門的儀器，當實驗室不具備此種儀器時，可採用冰凍乾燥法和乙腈乾燥法。乙腈乾燥法的關鍵是乙腈置換。樣品經上述處理後，浸入50%的乙腈水溶液中，然後依次更換70%、80%、90%、95%、100%的乙腈溶液，每次浸泡15～20分鐘，最後再換100%乙腈。
然後進行真空乾燥。即將乙腈置換後的樣品連同青黴素瓶一起放到真空鍍膜臺的空中置內，抽低真空，一般需30～50分鐘。樣品乾燥後，待其溫度公升至室溫時再放氣，取出樣品。
(5)樣品導電處理：用真空噴鍍法。所用儀器為真空噴鍍儀，樣品被安置在離蒸發源約10～15cm處的樣品台上，樣品進行旋轉活動，先噴碳，後噴金，噴鍍應均勻，完成後待鏡下觀察。
掃瞄電鏡的結構及原理
一 簡介 1特點 掃瞄電子顯微鏡主要特點是電子束在樣品上進行逐點掃瞄，獲得三維立體影象，影象觀察視野大 景深長 富有立體感。在觀察樣品表面形貌的同時，進行晶體學分析及成分分析。常規的掃瞄電鏡分辨本領通常為7 10nm,加速電壓在1 50 kv範圍。生物樣品一般用10 20kv,成像放大率幾十倍至幾十...
掃瞄電鏡和透射電鏡的區別完整版
一 分析訊號 1 掃瞄電鏡 掃瞄電子顯微鏡的製造是依據電子與物質的相互作用。當一束高能的入射電子轟擊物質表面時，被激發的區域將產生二次電子 俄歇電子 特徵x射線和連續譜x射線 背散射電子 透射電子，以及在可見 紫外 紅外光區域產生的電磁輻射。同時，也可產生電子 空穴對 晶格振動 聲子 電子振盪 等離...
透射電鏡樣品的製備方法
試驗材料為經過熱處理後的鋼材 一 樣品要求 1.粉末樣品基本要求 1 單顆粉末尺寸最好小於1 m 2 無磁性 3 以無機成分為主，否則會造成電鏡嚴重的汙染，高壓跳掉，甚至擊壞高壓槍 2.塊狀樣品基本要求 1 需要電解減薄或離子減薄，獲得幾十奈米的薄區才能觀察 2 如晶粒尺寸小於1 m，也可用破碎等機...