作者：董群偉，陳志峰， 陳少青， 孫奮勇，胡伶平，洪曼傑,梁超
【摘要】 目的**牛膝脫皮甾酮（achyranthes bidentata ecdysterone,abe）對去卵巢大鼠骨質疏鬆的**作用。方法選用8月齡sd雌性大鼠隨機分5 組: 假手術組、去卵巢組、低劑量牛膝脫皮甾酮處理組abeⅰ、中劑量牛膝脫皮甾酮處理組abeⅱ、高劑量牛膝脫皮甾酮處理組abeⅲ，以及α d3處理組，藥物灌胃，**3 個月後處死大鼠，進行相關的檢測。
結果高劑量與中劑量abe能夠明顯改善去卵巢後大鼠的骨密度與各項生物力學及骨形態計量學指標，低劑量處理組也有一定的**作用。結論牛膝脫皮甾酮對去卵巢大鼠骨質疏鬆具有防治作用，並呈劑量依賴性。
【關鍵詞】 牛膝脫皮甾酮；骨質疏鬆；骨密度；骨生物力學；骨形態學
絕經後骨質疏鬆症（postmenopausal osteoporosis，pmo）是原發性骨質疏鬆症中最常見的一種，其患病率為30% ～50%。骨質疏鬆症具有骨顯微結構的退化（骨小梁變細、斷裂、小梁孔隙增大等）及骨強度降低，遇輕微創傷便易發生骨折［1］。婦女在絕經前後最常發生的是橈骨遠端骨折及椎體壓縮骨折。
因此，骨質疏鬆症的防治已受到世界各國的重視。防治目的是減輕痛苦，預防發生骨折，提高老年婦女生活質量。 懷牛膝為莧科植物牛膝的乾燥根,為「四大懷藥」之一。
具有補肝腎、強筋骨、逐瘀通經、引血下行之功,主要用於腰膝痠痛、筋骨無力、經閉症瘕、肝陽眩暈之症。歷代文獻明確為**「骨痺」、「骨痿」的方劑共21個，涉及藥物77種，其中牛膝出現11次。課題組在前期研究工作中運用中藥血清學、反義核酸封閉、cdna 晶元等多種技術發現牛膝脫皮甾酮(abe)能夠有效促進成骨細胞的增殖，其分子機制與pka介導的通路有關 ［2-4］。
本研究擬通過去卵巢大鼠的動物模型，觀察牛膝脫皮甾酮對絕經後骨質疏鬆的**作用，以進一步闡明中藥牛膝抗骨質疏鬆的作用，為牛膝脫皮甾酮的臨床應用打下基礎。
1 材料與方法
1.1 試劑與動物牛膝脫皮甾酮（achyranthes bidentata ecdysterone,abe）由美國猶他州立大學藥學院王興河教授惠贈。α d3，以色列梯瓦製藥工業****生產。
8 月齡雌性sd 大鼠（合格證號：粵檢證字第2006a047號），體質量(267.18±21.
15)g,按清潔級標準飼養，大鼠可以自由進食和飲水，各組大鼠均無妊娠和生育史。
1.2 動物模型製備 8 月齡未交配的雌性sd 大鼠分籠飼養，自由攝食和攝水，使用標準飼料，其中鈣含量1.33 %，磷含量0.
95 %。 隨機分為假手術組、去卵巢組及abeⅰ、ⅱ、ⅲ組、α d3組（陽性對照），每組10 只。除假手術組（單純切開**不做卵巢切除）大鼠外，其餘行雙側卵巢切除術，假手術組和去卵巢組均用體積分數為50% 的乙醇(溶劑對照)0.
5 ml,abeⅰ、ⅱ、ⅲ組分別用1.0,2.0,4.
0 mg/kg/d abe灌胃給藥。所有動物給藥時間為5周，每週稱體質量1 次，按體質量變化調整給藥量，各組體質量均無明顯差異。此外，各組小鼠的雌激素水平都採用雌二醇試劑盒(sigma 公司)嚴格監控，在整個飼養過程中都沒有明顯變化，假手術組雌激素水平為（17.
88±2.45） pg/ml，其餘各組雌激素水平為（9.31±0.
58） pg/ml。
1.3 大鼠血清生化指標的檢測全自動生化分析儀測定血清ca 、p 及鹼性磷酸酶(alkaline phosphatase，alp) 的活性。
1.4 大鼠骨密度的檢測採用美國hologic雙能x線骨密度儀(精度1%; cv<1%,g/cm2 )檢測腰椎骨(l1-5) 和左股骨的骨密度(bone mineral density,bmd) 。掃瞄密度為17.
912 cm,點解析度為0.064 0 cm。
1.5 離體股骨生物力學指標的檢測取大鼠左股骨,去除附著肌肉及近側端關節軟骨,用-80 ℃的超低溫冰箱儲存。使用時從冰箱取出復溫,以萬能電子材料試驗機進行生物力學檢測。
1.6 骨組織形態計量學分析取大鼠右股骨標本，放入70 %（φ）酒精，4 ℃冰箱內固定3 d後，依次放入80 %、95 %酒精中脫水各24 h,純丙酮中脫水2 次，二甲苯透明2 次，滲透液內滲透過夜。包埋，乾燥器中放置4 h 後，40～60 ℃溫箱中固化24 h後切出10 μm 厚切片， 採用1 %甲苯胺藍染色。
測量的形態引數：①骨小梁數目( 即每mm2 骨小梁的數量。②骨小梁的寬度［即測量吸收陷窩附近的同一骨小梁的寬度。
③骨小梁的體積［tbv (mm3)］即包括骨小梁礦化和未礦化的類骨質體積之和。④骨小梁間隙［即骨小梁板間的距離。⑤平均皮質骨厚度(μm) 即所測範圍內骨皮質寬度的平均值。
⑥骨小梁體積佔全部骨組織的百分比(tbv/ttv %)。
1.7 統計學處理各組資料均用（±s）表示，用spss 10.0統計軟體進行統計分析。採用t檢驗,p<0.05為差異有顯著性。
2 結果
2.1 abe處理對去卵巢大鼠血清生化指標的影響去卵巢組大鼠的alp與假手術組相比明顯公升高（p<0.01），abe各處理組的alp濃度下降，且呈現明顯的量效關係；血清ca、p的濃度各組之間差異無顯著性。
見表1。表1 abe處理對去卵巢大鼠血清生化指標的影響（略）
2.2 abe處理對大鼠骨密度的影響去卵巢組大鼠與假手術組相比，腰椎與股骨的骨密度明顯降低（p<0.01），而各abe處理組均能明顯促進骨密度的增加。
其中高劑量處理組abe(ⅲ)的**作用最為明顯，接近或達到假手術組的水平。