綜合實驗二
研究材料：蠶砂
提取成分：脫鎂葉綠酸製劑：微囊
本實驗提供了參考的微囊製備方法，要求學生自行設計一種不同的微囊製備方法。
一、實驗目的
1. 了解蠶砂中脫鎂葉綠酸提取分離原理和方法；
2. 了解脫鎂葉綠酸的結構表徵和含量分析測定方法。
3. 了解微囊的基本原理；
4. 比較不同微囊的工藝方法的包封效果。
二、實驗原理
脫鎂葉綠酸(pheophorbide)是由葉綠素分子脫去鎂離子後進一步水解而形成的化合物，具有顯著的抗炎、抗腫瘤、保護胃腸粘膜等藥理作用。
中藥蠶砂在乙醇、丙酮等有機溶劑的萃取下獲得葉綠素粗品，然後在酸性條件下脫去植醇長鏈和金屬離子，得到主要產物脫鎂葉綠酸a，再對產物進行鹽酸乙醚轉溶、真空乾燥得到純度很高的脫鎂葉綠酸。
製備微囊有不同的方法：復凝聚法是利用兩種電荷相反的高分子材料，交聯形成復合囊材，將囊心物包裹其中形成微囊；溶媒－非溶媒法是在囊材溶液中加入一種對囊材不溶的溶劑(非溶劑)引起相分離，而將藥物包裹成囊的方法；液中乾燥法是從乳狀液中除去分散相揮發性溶劑以製備微囊的方法，亦稱乳化－溶劑揮發法。
三、脫鎂葉綠酸的提取
<1>浸提：取中藥材蠶砂50g於500ml圓底燒瓶中，加100ml水軟化2h；加入150ml丙酮，在70℃恆溫水浴中回流浸提90min，抽濾，得浸提液a。濾渣倒回圓底燒瓶中，再加入50ml蒸餾水，100ml丙酮，在70℃恆溫水浴中回流浸提60min，抽濾，得浸提液b。
合併浸提液；
<2>萃取：用旋轉蒸發儀在50℃下將浸提液濃縮至50ml，移至500ml分液漏斗中，依次加入150 ml乙醚、30%hcl 100ml，振盪5min，進行轉溶萃取，靜置至完全分層。將下層水溶液放出置於燒杯，放入冰水浴中，慢慢滴入naoh的飽和溶液，同時進行攪拌，直至 ph 值在2.
5-3之間，3000rpm離心10min，所得沉澱即為脫鎂葉綠酸。
<3>真空乾燥：將沉澱在60℃下真空乾燥箱中烘乾2h，稱重。
四、脫鎂葉綠酸的分析測定方法
1. 含量測定
方法：準確稱取10mg樣品，溶於100 mldmf溶液中，於波長667nm測定吸光值。含量計算方程y(吸光值)=0.0275x(mg/l)+0.0025。
2. 紫外和螢光光譜測定
對產物進行紫外螢光測試：取10mg脫鎂葉綠酸a提取物粉末溶於100mldmf溶液中，在300nm—800nm波長範圍內進行紫外和螢光掃瞄。
五、抗自由基活性測定
以維生素c為對照，將樣品分別配製0、25、50、100、200、400 mg/l各供試品溶液，取2m l 加入2 m l 1 mm ***h 的乙醇溶液, 混合均勻，黑暗下室溫避光反應30 m in，在517 nm 處測定吸光度, 以乙醇替代樣品為空白組, 計算自由基清除率(% ) = [ 1- 樣品吸光值/空白吸光值]× 100% 。
六、微囊的製備
1、復凝聚法
取脫鎂葉綠酸0.1g 置乾燥研缽中研細, 加阿拉伯膠粉1g和少量水研磨成混懸液,再加入30ml蒸餾水,攪拌均勻, 然後加入與阿拉伯膠等量的明膠溶液(1g用30ml水40℃溶解保溫), 混勻, 置於燒杯中於38℃的恆溫水浴中攪拌。滴加10％醋酸調節ph 值至3.
5 ～ 4.0, 繼續攪拌約10min(速度為25 ～30 r /min)後, 加入與體系等溫的2 倍蒸餾水, 體系自然冷卻至30℃以下後, 冰浴迅速冷卻至10℃以下, 用25％戊二醛溶液適量固化15min, 靜置使其充分沉降, 傾去上清液, 微囊過濾, 用水洗至無醛味,即得脫鎂葉綠酸微囊。
2、自行設計一種微囊製備方法。
七、微囊質量分析
1、微膠囊大小的測定
在顯微鏡下觀察測定100 微膠囊的直徑，記錄在下表中。
按下式計算微膠囊的平均直徑：
d** = ∑(nidi)/ ∑ni
式中ni＝個數，di＝體積直徑
2、載藥量和包封率的測定
載藥量是指包裹在微囊中的藥物佔微囊量的百分比例。
包封率是指包裹在微囊中的藥物佔投藥量的百分比例。
樣品液準備：
精密稱取微囊適量, 於研缽中研細後, 精密稱取約100mg, 置於50 ml棕色量瓶中, 加入0. 1 mol /l的鹽酸溶液20ml, 超聲30min使微囊完全破壞(鏡檢已無微囊存在), 用dmf稀釋至刻度, 搖勻, 濾過, 精密量取續濾液1ml於10 ml棕色量瓶中, 加入dmf定容至刻度, 於667 nm 波長處測定吸收度a 值。
八、實驗結果與討論
1. 記錄實驗條件、現象、各試劑用量及產品的重量和含量。
2. 脫鎂葉綠酸的紫外和螢光光譜。
3. 對自由基的清除率。
4. 微囊的大小、載藥量和包封率。
九、思考題
1. 試分析哪些因素影響產品的產率和純度，怎樣控制？
2. 脫鎂葉綠酸具有什麼光譜特徵？
3. 自由基的清除能力與哪些因素有關？
4.微膠囊的形狀、大小和包封率與那些因素有關？如何控制？
5．試比較2種微囊包封率的優缺點。
所需試劑：
蠶砂1公斤、丙酮6瓶、乙醚3瓶、鹽酸2瓶、dmf2瓶、***h1瓶、明膠、阿拉伯膠、戊二醛各1瓶。
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