e. 用pbs或0.9%nacl洗兩遍，每次3分鐘。
f. 滴一滴抗螢光淬滅封片液於載玻片上，蓋上貼有細胞的蓋玻片，盡量避免氣泡。使細胞接觸封片液，切勿弄反。
注：室溫下晾乾,在螢光(檢測波長360nm,參比波長450nm ) 顯微鏡下觀察, 並隨機拍照。
g. 螢光顯微鏡可檢測到呈藍色的細胞核。激發波長在350nm左右，發射波長在460nm左右。
hoechst 33258的吸收光譜和發射光譜，左側峰為吸收光譜，右側峰為發射光譜
2. 懸浮細胞
a. 離心收集細胞樣品於1.5ml離心管內，加入0.5ml固定液，緩緩懸起細胞，固定10分鐘或更長時間（可4℃過夜）。
b. 離心去固定液，用pbs或0.9%nacl洗兩遍，每次3分鐘。洗滌期間手動晃動。
c. 最後一次離心後吸去大部分液體保留約50ml液體，再緩緩懸起細胞，滴加至載玻片上，盡量使細胞分布均勻。
d. 稍晾乾，使細胞貼在載玻片上不易隨液體流動。
e. 均勻滴上0.5ml hoechst 33258染色液，染色5分鐘。用吸水紙從邊緣吸去液體，微晾乾。
f. 用pbs或0.9%nacl洗兩遍，每次3分鐘。
g. 滴一滴抗螢光淬滅封片液於載玻片上，蓋上一潔淨的蓋玻片，盡量避免氣泡。
h. 螢光顯微鏡可檢測到呈藍色的細胞核。
3. 組織切片
a. 常規包埋切片後，脫臘，透明。
b. pbs或0.9%nacl洗兩遍，每次3分鐘，吸盡液體。洗滌時宜用搖床，或手動晃動數次。可在六孔板中操作。
c. 加入0.5ml hoechst 33258染色液，染色5分鐘。也宜用搖床，或手動晃動。
d. 用pbs或0.9%nacl洗兩遍，每次3分鐘。
e. 將切片置於載玻片上，滴一滴抗淬滅封片液，蓋上一潔淨的蓋玻片，盡量避免氣泡。
f. 螢光顯微鏡可檢測到呈藍色的細胞核。
如果螢光顯微鏡是倒置的，就不用爬片，可以直接固定，染色，觀察。
不是倒置的無法直接看，爬片後，倒蓋在波片上，顯微鏡才可以看。主要是看顯微鏡的型別問題。
【貯存條件】
放在棕色瓶中4°c儲存最多可達6個月。-20℃避光儲存，一年有效。
螢光染料都存在淬滅的問題，建議染色後盡量當天完成檢測。
注意：hoechst 33258可能致癌或突變。戴手套和面罩，在通風廚中使用。
設陰性對照組，2.5 μg/ml，5 μg/ml，10 μg/ml，20 μg/ml劑量組，6孔板（1×105/孔）細胞貼壁後加藥培養48小時，離心棄上清，加入pbs洗2次，4%多聚甲醛固定10min, pbs洗2次,用hoechst 33258(5mg/l)染色5min,再用pbs洗2次,室溫下晾乾,在螢光(檢測波長360nm,參比波長450nm ) 顯微鏡下觀察, 並隨機拍照。
hoechst則為膜通透性的螢光染料，故細胞在處於壞死或晚期調亡時細胞膜被破壞，這時可為pi著紅色。正常細胞和中早期調亡細胞均可被hoechst著色，但是正常細胞核的hoechst著色的形態呈圓形，淡蘭色，內有較深的蘭色顆粒；而調亡細胞的核由於濃集而呈亮蘭色，或核呈分葉，碎片狀，邊集。
3 3感恩母親
姓名 張瑞雪聯絡 132 學校 濰坊市壽光市古城街道北洛小學 組別 小學組 母親給女兒的愛是無私的,我的母親為了我和姐姐，為了我們一家天天默默無聞，吃苦受累好無怨言的犧牲了她自己的所有休息的時間.她是這個世界上最疼我 愛我 關心我的人 我的母親是幼兒教師，每天在學校裡工作工作繁忙，小朋友們一天的吃喝...
33涉密人員責任
1.目的 明確0各崗位涉密人員對保密工作負的直接責任 2.範圍 適用於0所有涉密人員 3.引用檔案 3.1 中華人民共和國保守國家秘密法實施辦法 1990年5月25日國家保密局令第1號發布 3.2 中共 委員會辦公室 國家保密局關於國家秘密載體保密管理規定 廳字200058號 3.3 中華人民共和國...
失戀33天對白
王小賤 房東的兒子要結婚，他把承租給我那房子，要收回去當婚房使，晴天霹靂呀！你說我幫你幹完混蛋事，為什麼這報應落我腦袋上啊 黃小仙 別那麼悲觀嘛，換換環境，換換風水啊。王小賤 我能不悲觀嗎？我要不在那兒住。我就得在大興租乙個兩居，每天早上四點半起床，要不然就得在國貿附近跟四個大老爺們兒合租一陽台，多...