發布時間：2008-6-30作者：胡艷麗，王克然責任編輯：admin
飼料是畜牧養殖生產中的重要生產資料，飼料中蛋白質含量是判定飼料營養價值的一項重要指標，飼料中粗蛋白質包括真蛋白質和非蛋白質兩部分含氮物質，後者主要包括游離氨基酸、硝酸鹽、氨等，故不能反映出飼料蛋白質對動物的真正營養價值。目前，部分養殖場戶存在乙個認識誤區，認為標籤上標註的粗蛋白質高，營養價值就高。為此，部分飼料生產企業利用人們認識上的誤區，在飼料生產中新增羽毛粉、血粉、尿素等不易被動物肌體吸收的物質，飼料產品中粗蛋白含量上去了，但卻沒有相應的營養價值，造成養殖效益的低下。
漯河市畜產品質量安全監測檢驗中心成立以來,每年要對送檢的1000多個飼料樣品進行蛋白質的測定，對如何測定飼料中真蛋白的含量、有哪些注意事項，有了一些親身的感受和認識，現提出與大家共同討論、互相學習：
1適用範圍
本操作方法適用配合飼料、濃縮飼料和單一飼料。
2原理樣品在水溶液中，加入過量硫酸銅，在鹼性條件下，純蛋白被氫氧化銅沉澱，用水洗去水溶性含氮物，沉澱部分按粗蛋白的測定方法測定其含氮量。
3試劑3.1 10%硫酸銅溶液：
稱取五水硫酸銅10g用水溶解，轉移至100ml容量瓶中定容至刻度。3.2 2.5%氫氧化鈉溶液：
稱取2.5g氫氧化鈉用水溶解，轉移至100ml容量瓶中定容至刻度。3.3硫酸：化學純，含量為98%，無氮。
3.4催化劑：0.4g硫酸銅，5個結晶水，6g硫酸鈉，均為化學純，磨碎混勻。
3.5氫氧化鈉：化學純，40%水溶液（m/v）。3.5.1配製方法：
500g氫氧化鈉+1100ml蒸餾水。3.6硼酸：化學純，2%水溶液（m/v）。3.6.1配製方法：
20.5g硼酸+1000ml蒸餾水。3.7混合指示劑：
甲基紅，1%乙醇溶液，溴甲酚綠，0.5%乙醇溶液，兩溶液等體積混合，在陰涼處儲存期為三個月。
3.7.1溴甲酚綠，0.5%乙醇溶液配置：
溴甲酚綠0.125g+25ml乙醇。
3.7.2甲基紅，1%乙醇溶液配置：
甲基紅0.025g+25ml乙醇。
3.8鹽酸標準溶液：鄰苯二甲酸氫鉀法標定，按gb/t601製備。
3.8.10.
02mol/l鹽酸標準溶液：1.67ml鹽酸，分析純，注入1000ml蒸餾水中。
3.8.20.1mol/l鹽酸標準溶液：8.3ml鹽酸，分析純，注入1000ml蒸餾水中。
3.9硫酸銨：分析純，乾燥。3.10蔗糖：分析純。
4儀器裝置
4.1實驗室用樣品粉碎機。
4.2分樣篩：孔徑0.45mm（40目）。4.3分析天平：感量0.0001g。4.4電爐。
4.5滴定管：酸式，25、50ml。4.6凱氏燒瓶：250ml。
4.7凱氏蒸餾裝置：常量直接蒸餾式或半微量水蒸汽蒸餾式。
4.8錐形瓶：250ml。
4.9容量瓶：100ml。
4.10燒杯：200ml。
4.11乾燥箱。
5分析步驟
5.1半微量法5.1.1樣品的處理
稱取待測樣品0.5-1g（精確到0.1mg）於200ml（4.
10）燒杯中，加入50ml蒸餾水，用玻璃棒攪拌均勻，在電爐（4.4）上加熱煮沸，加入20ml10%硫酸銅溶液（3.1），再加入20ml2.
5%氫氧化鈉溶液（3.2）攪勻，從電爐上取下，在室溫放置2h，然後用傾瀉法將樣品過濾到濾紙上，用少量溫水多次洗滌燒杯和沉澱物，直至洗出液無硫酸根離子（用10%氯化鋇溶液來檢驗濾液無沉澱），連同漏斗一起放入80℃乾燥箱（4.11）中烘乾，將濾紙和沉澱物小心放入250ml凱氏燒瓶（4.
6）中，加入6.4g催化劑（3.4），20ml濃硫酸（3.
3），在電爐（4.4）上消化，樣液澄清後繼續消煮2h，取下冷卻後加入20ml蒸餾水，轉入100ml容量瓶（4.9）中，冷卻後用水稀釋至刻度，搖勻，做為試樣分解液。
同時做空白實驗。5.1.
2蒸餾將半微量蒸餾裝置（4.7）的冷凝管末端浸入裝有20ml硼酸（3.6）的吸收液和2滴混合指示劑（3.
7）的錐形瓶（4.8）內。蒸汽發生器的水中應加入甲基紅指示劑數滴，硫酸數滴，在蒸餾過程中保持此液為橙紅色，否則需補加硫酸。
準確移取試樣分解液10-20ml注入蒸餾裝置中，小心提
起玻璃塞使之流入反應室，同時用蒸餾水沖洗蒸餾裝置入口內壁使樣品分析液和沖洗液一併流入反應室，迅速將玻璃塞塞好，且在入口處加水密封，防止漏氣。蒸餾4min降下錐形瓶使冷凝管末端離開液面，再蒸餾1min，用蒸餾水沖洗冷凝管末端，洗液均流入錐形瓶內，然後停止蒸餾。5.
1.3滴定
蒸餾後的吸收液立即用0.02 mol/l鹽酸標準溶液（3.8.1）滴定，溶液由藍綠色變成灰紅色為終點。5.2常量法
5..2.1稱取待測樣品0.
5-1g（精確到0.1mg）於200ml（4.10）燒杯中，加50ml蒸餾水，用玻璃棒攪拌均勻，在電爐（4.
4）上加熱煮沸，加入20ml10%硫酸銅溶液（3.1），再加入20ml2.5%氫氧化鈉溶液（3.
2）攪勻，從電爐上取下，在室溫放置2h，然後用傾瀉法將樣品過濾到濾紙上，用少量溫水多次滌燒杯和沉澱物，直至洗出液無硫酸根離子（10%氯化鋇溶液來檢驗濾液無沉澱），連同漏斗一起放入80℃乾燥箱內烘乾，將濾液和沉澱物小心放入250ml凱氏燒瓶（4.6）中，加入6.4g催化劑（3.
4），20ml濃硫酸（3.3），在電爐上消化，樣液澄清後繼續消煮2h，取下放冷後加入60-100ml蒸餾水，搖勻冷卻。同時做空白實驗。
5.2.2將蒸餾裝置（4.
7）的冷凝管末浸入裝有25ml硼酸（3.6）吸收液和2滴混合指示劑（3.7）的錐形瓶內。
然後小心的向凱氏燒瓶（4.6）中加入50ml氫氧化鈉溶液，輕輕搖動凱氏燒瓶，使溶液混勻後再加熱蒸餾，直至流出液為100ml，降下錐形瓶，使冷凝管末端離開液面，繼續蒸餾1-2min，並用蒸餾水沖洗冷凝管末端，洗液均需流入錐形瓶內，然後停止蒸餾。5.
2.3滴定
蒸餾後的吸收液立即用0.1mol/l鹽酸標準溶液（3.8.2）滴定，溶液由藍綠色變成灰紅色為終點。5.3蒸餾步驟的檢驗
精確稱取0.2g硫酸銨（3.9）代替試樣，按5.
1或5.2步驟進行操作，測得硫酸銨含氮量為21.19±0.
2%，否則應檢查加鹼、蒸餾和滴定各步驟是否正確。5.4空白測定
稱取蔗糖（3.10）0.5g，代替試樣，按5.
1或5.2步驟進行空白測定，消耗0.1mol/l鹽酸標準溶液（3.
8.2）的體積不得超過0.2ml。
消耗0.02mol/l鹽酸標準溶液（3.8.
1）體積不得超過0.3ml。
6分析結果的表述
6.1計算見下式：
真蛋白（%）=
(v1-v2)×c×0.0140×6.25
×100
m×v′/v
式中：v1—滴定試樣時所需標準溶液的體積，ml；v2—滴定空白時所需標準溶液的體積，ml；c—鹽酸標準溶液的濃度，mol/l；v—試樣分解液的總體積，ml；v′—試樣分解液蒸餾用體積，ml；0.0140—每毫克當量氮的克數；6.
25—氮換算成蛋白質的平均係數。6.2重複性
每個試樣取兩個平行樣進行測定，以其算術平均值為結果。當真蛋白含量在25%以上時，允許相對偏差為1%。當真蛋白含量在10%—25%之間時，允許相對偏差為2%。
當真蛋白含量在10%以下時，允許相對偏差為3%。
7關鍵步驟及注意事項
7.1傾瀉法過濾洗滌時，燒杯中的沉澱物一定要徹底清洗。室溫較低時洗滌用水的溫度要稍微高一點，以保證燒杯中的沉澱物徹底轉移。
7.2過濾時的濾液達到400ml後再用10%的氯化鋇溶液檢驗濾液是否有沉澱，這樣可以減少檢驗次數。
7.3烘乾沉澱時，可將濾液倒掉，將漏斗和盛放濾液的容器同時放入乾燥箱，以免漏斗放置不穩沉澱物遺失。
7.4加入混合催化劑在電爐上消化時，要時刻觀察樣液的顏色變化（有些單一飼料中含雜質較多不易觀察顏色），樣液徹底澄清後再計時繼續消煮2h。7.
5半微量法測定真蛋白轉移時要遵循少量多次的原則，一方面轉移的溶液體積不超過100ml，也要做到轉移徹底。
8檢測結果比較：
棉柏1真蛋白——42.31%，粗蛋白——42.91%；
ddg真蛋白——31.10%，粗蛋白——31.56%；肉鬆粉真蛋白——78.
89%，粗蛋白——79.15%；豆柏真蛋白——46.28%，粗蛋白——46.
68%；豬濃縮料真蛋白——39.98%，粗蛋白——41.03%；豬配合料真蛋白——16.
39%，粗蛋白——16.66%；以上為合格產品真蛋白比粗蛋白含量稍微有點低，但不會低太多，看下面的一組不合格產品的比較：
棉柏2真蛋白——37.30%，粗蛋白——40.51%；ddg真蛋白——34.
56%，粗蛋白——37.88%；肉鬆粉真蛋白——75.15%，粗蛋白——79.
85%；豬濃縮料真蛋白——36.59%，粗蛋白——40.69%；豬配合料真蛋白——16.
39%，粗蛋白——19.37%；這些資料相差較大，如果只檢驗粗蛋白不能夠表明飼料的可利用價值，所以一旦在使用過程中效果不好，也可以考慮檢驗真蛋白是否達到標準。
通過對飼料中真蛋白質和粗蛋白質測定，可以發現飼料產品標示成分的差異，飼料生產企業在採購原料時，對飼料中真蛋白質的測定，應做為配製飼料的依據；同時，對養殖場戶來說，認清差別，對提高養殖效益有著較好的意義。
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前言本標準是在參閱了國內外文獻的基礎上，根據我國技術發展水平研究制定的，採用了酶聯免疫法 高效液相色譜 螢光檢測法和氣相色譜 質譜法。本標準由浙江省農業廳提出並歸口。本標準由浙江省畜產品質量安全檢測中心 浙江省疾病預防控制中心負責起草，浙江一星集團飼料有限責任公司參與起草。本標準主要起草人 陳慧華 ...
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