本指導原則是對白蛋白測定試劑（盒）的一般要求，申請人應依據產品的具體特性確定其中內容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應的科學依據，並依據產品的具體特性對註冊申報資料的內容進行充實和細化。
本指導原則是供申請人和審查人員使用的指導檔案，不涉及註冊審批等行政事項，亦不作為法規強制執行，如有能夠滿足法規要求的其他方法，也可以採用，但應提供詳細的研究資料和驗證資料。應在遵循相關法規的前提下使用本指導原則。
本指導原則是在現行法規、標準體系及當前認知水平下制定的，隨著法規、標準體系的不斷完善和科學技術的不斷發展，本指導原則相關內容也將適時進行調整。
一、適用範圍
依據《體外診斷試劑註冊管理辦法》（國家食品藥品監督管理總局令第5號）和《食品藥品監管總局關於印發體外診斷試劑分類子目錄的通知》（食藥監械管〔2013〕242號），本指導原則適用於按ⅱ類醫療器械管理的白蛋白檢測試劑（盒），產品類別為：ⅱ-1用於蛋白質檢測的試劑。
白蛋白測定試劑（盒）適用於使用溴甲酚綠法（bcg）、溴甲酚紫法（bcp）對血清、血漿中白蛋白進行定量檢測的白蛋白測定試劑（盒），包括手工試劑和在半自動、全自動生化分析儀上使用的試劑。
本指導原則不適用於幹化學方法測定白蛋白試劑（盒）。
二、註冊申報資料要求
（一）綜述資料
白蛋白是屬於球蛋白的一種蛋白質。廣泛分布在各種動植物中，在人體血液，組織液中含有白蛋白，它最重要的作用是維持膠體滲透壓。白蛋白的分子結構含585個氨基酸殘基的單鏈多肽，分子量為66458，分子中含17個二硫鍵，不含有糖的組分。
在體液ph7.4的環境中，白蛋白為負離子，每分子可以帶有200個以上負電荷。它是血漿中很重要的載體，許多水溶性差的物質可以通過與白蛋白的結合而被運輸。
白蛋白（又稱清蛋白，albumin,alb）是由肝實質細胞合成，在血漿中的半壽期約為15—19天，是血漿中含量最多的蛋白質，佔血漿總蛋白的40%—60%。其合成率雖然受食物中蛋白質含量的影響，但主要受血漿中白蛋白水平調節，在肝細胞中沒有儲存，在所有細胞外液中都含有微量的白蛋白。白蛋白是血漿中含量最多、分子最小、溶解度大、功能較多的一種蛋白質。
白蛋白增高主要見於血液濃縮而致相對性增高，如嚴重脫水和休克、嚴重燒傷、急性出血、慢性腎上腺皮質功能減低症。白蛋白降低常見於肝硬化合併腹水及其他肝功能嚴重損害(如急性肝壞死、中毒性肝炎等)營養不良、慢性消耗性疾病、糖尿病、嚴重出血腎病症候群等。
綜述資料主要包括產品預期用途、產品描述、有關生物安全性的說明、研究結果的總結評價以及同類產品上市情況介紹等內容，其中同類產品上市情況介紹部分應著重從方法學、臨床應用情況、效能指標等方面寫明擬申報產品與目前市場上已獲批准的同類產品之間的異同。應符合《體外診斷試劑註冊管理辦法》和《關於公布體外診斷試劑註冊申報資料要求和批准證明檔案格式的公告》（國家食品藥品監督管理總局公告2023年第44號）的相關要求。
（二）主要原材料研究資料（如需提供）
1.試劑盒所用與白蛋白結合的染料（如溴甲酚綠或溴甲酚紫）詳細試驗資料。如外觀、純度或試劑等級，**商資訊和資質，採購合同、原輔料效能指標及合格證（檢驗證書）等。
2.企業內部參考品（白蛋白標準液）的原料選擇、製備、定值過程及試驗資料；白蛋白標準液的溯源性檔案，包括具體溯源鏈、實驗方法、資料及統計分析等詳細資料。白蛋白已具備有證參考物質（如crm470、erm/ifcc），生產企業內部白蛋白標準品（液）應通過建立自己的參考品體系並溯源。
（三）主要生產工藝及反應體系的研究資料（如需提供）
1.主要生產工藝介紹，可以流程圖方式表示，並簡要說明主要生產工藝的確定依據。
2.產品反應原理介紹。
3.檢測體系反應條件確定：申請人應考慮反應時間、反應溫度、實驗引數、儀器型號等條件對產品效能的影響，通過試驗確定上述條件的最佳組合。
4.檢測體系中樣品加樣方式及加樣量確定：申請人應考慮樣品加樣方式、加樣量對產品檢測結果的影響，通過實驗確定最佳的加樣方式及加樣量。
如樣本需採取稀釋或其他必要的方法進行處理後方可用於最終檢測，申請人還應對可用於樣本稀釋的物質或處理方法進行研究，通過試驗確定最終選擇的用於樣本稀釋的物質或處理方法。
5.不同適用機型的反應條件如果有差異應分別詳述。
（四）分析效能評估資料
企業應提交製造商在產品研製階段對試劑盒進行的所有效能驗證的研究資料，包括具體研究方法、實驗資料、質控標準、統計分析等詳細資料。對於白蛋白測定試劑（盒）建議選擇多批產品對以下分析效能進行研究：分析靈敏度、線性範圍、精密度、準確度等指標。
對於適用多個機型的產品，應提供如產品說明書【適用儀器】項中所列的所有型號儀器的效能評估資料及其實驗引數。
效能評估應採用臨床樣本，並盡量採用異常人群（低蛋白血症、肝硬化患者）樣本，如果線性範圍低端樣本不足，可以考慮補充低風險患者樣本或健康人群。
1.分析靈敏度：分析靈敏度的確定常使用同批號試劑對已知濃度樣品（或有證參考物質）在試劑盒規定引數讀數點下的吸光度值（a）或差值（δa），換算成40.
0g/l的吸光度或吸光度差值。
2.線性範圍：建立試劑線性範圍所用的樣本基質應盡可能與臨床實際檢測的樣本相似，理想的樣本為分析物濃度接近預期測定上限的混合人血清，且應充分考慮多倍稀釋對樣本基質的影響。
3.精密度：測量精密度的評估應至少包括兩個濃度水平的樣本進行，兩個濃度都應在試劑盒的測量範圍內且有一定的臨床意義（醫學決定水平），通常選用該檢測指標的正常參考區間附近和異常高值樣本。
兩個濃度都選用高值樣品，可能致cv偏小，也不能選用接近最低檢出限的樣品，可能致cv偏大。
4.準確度
（1）與企業內部白蛋白校準品（液）的比對研究
使用已溯源的企業內部定值參考品進行驗證，重點觀察檢測結果的偏差情況。
（2）方法學比對
採用參考方法或國內/國際普遍認為質量較好的已上市同類試劑作為參比方法，與擬申報試劑同時檢測臨床樣品，從測定結果間的差異了解擬申報試劑與參比方法間的偏倚。
在實施方法學比對前，應分別對擬申報試劑和對比試劑進行初步評估，只有在確認兩者都分別符合各自相關的質量標準後方可進行比對試驗。方法學比對時應注意質量控制、樣本型別、濃度分布範圍並對結果進行合理的統計學分析。
5.干擾物質及交叉反應研究。
（五）參考區間確定資料
參考區間確定所採用的樣本**、確定方法及詳細的試驗資料。
（六）穩定性研究資料
穩定性研究資料主要涉及申報試劑的穩定性研究。包括效期穩定性（實時穩定性）、運輸穩定性、開瓶穩定性及熱穩定性等研究，申請人可根據實際需要選擇合理的穩定性研究方案。穩定性研究資料應包括研究方法的確定依據、具體的實施方案、詳細的研究資料以及結論。
對於效期穩定性研究，應提供至少三批樣品在實際儲存條件下儲存至成品有效期後的研究資料。
（七）臨床評價資料
試劑（盒）按照《體外診斷試劑註冊管理辦法》及《關於發布體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則的通告》（國家食品藥品監督管理總局通告2023年第16號）進行臨床試驗。
1.研究方法
選擇境內已批准上市、臨床普遍認為質量較好的同類產品作為對比試劑，採用試驗用體外診斷試劑（以下稱考核試劑）與之進行對比試驗研究，證明本品與已上市產品等效或優於已上市產品。建議企業盡量選擇方法學相同、線性範圍及精密度等效能接近的同類試劑作為對比試劑。
2.臨床試驗機構的選擇
（1）第二類產品申請人應當選定不少於2家（含2家）國家食品藥品監督管理總局資質認可的臨床試驗機構開展臨床試驗。
（2）臨床試驗機構應有能力提供臨床評價所需的各類樣本，實驗操作人員有足夠的時間熟悉檢測系統的各環節（儀器、試劑、質控及操作程式等），熟悉臨床試驗方案。在整個實驗中，考核試劑和對比試劑都應處於有效的質量控制下，定期對儀器進行校準，最大限度保證試驗資料的準確性及可重複性。
（3）不同的臨床試驗機構應盡可能使用同一批次考核試劑進行臨床試驗，以便對資料進行科學客觀的統計分析。
（4）對比試劑統一。
3.臨床試驗方案
臨床試驗實施前，研究人員應從流行病學、統計學、臨床醫學、檢驗醫學等多方面考慮，設計科學合理的臨床研究方案。各臨床研究機構的方案設定應基本一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預定的方案實施，不可隨意改動。整個試驗過程應在臨床研究機構的實驗室內並由本實驗室的技術人員操作完成，申報單位的技術人員除進行必要的技術指導外，不得隨意干涉實驗程序，尤其是資料收集過程。
試驗方案中應確定嚴格的病例納入/排除標準，任何已經入選的病例再被排除出臨床研究都應記錄在案並明確說明原因。在試驗操作過程中和判定試驗結果時應採用盲法及樣本隨機分配以保證試驗結果的客觀性。對於新方法測定白蛋白試劑建議明確測定原理或方法學定義的研究，應在方案中明確前後兩次濃度變化有臨床意義的標準。
臨床試驗中所涉及的樣本型別應與產品說明書一致，且每種樣本型別例數的選擇應符合基本的統計學要求。臨床試驗機構選用的對比試劑與其適用機型匹配。
4.研究物件選擇
4.1臨床試驗樣本量的確定：申請人或臨床研究者應根據產品臨床使用目的，與該產品相關疾病的臨床發生率確定臨床研究的樣本量。
在符合指導原則有關最低樣本要求的前提下，還應符合統計學要求。
4.1.1臨床研究的總樣本數至少為200例。
4.1.2應考慮樣本量的分布。樣本量的選擇應符合統計學及相關指導原則的要求。
4.1.3樣本濃度應覆蓋考核試劑檢測範圍，盡可能均勻分布。不少於30%樣本的測定值處於參考區間以外，但在測量範圍內。
4.2如果考核試劑同時適用於血清或血漿樣本型別，可完成乙個樣本型別（血清或血漿）不少於200例的臨床研究，同時可選至少100例血清或血漿同源樣本進行比對研究。
4.3建議在臨床試驗中選擇部分含干擾物質的標本進行對比研究，包括高脂、溶血、黃疸的樣本。血清中多種蛋白成分如a1-球蛋白、轉鐵蛋白、觸珠蛋白也會和bcg或bcp反應，以從臨床角度驗證對試劑的影響。
5.統計學分析
對臨床試驗結果的統計應選擇合適的統計方法，如相關分析、線性回歸、受試者工作特徵（receiver operating characteristic curve，roc）曲線分析等。對於對比實驗的等效性研究，最常用是對考核試劑和對比試劑兩組檢測結果的相關及線性回歸分析，應重點觀察相關係數（r值）或判定係數（r2）、回歸擬合方程（斜率和y軸截距）等指標。結合臨床試驗資料的正/偏態分布情況，建議統計學負責人選擇合理的統計學方法進行分析，統計分析應可以證明兩種方法的檢測結果無明顯統計學差異。
在臨床研究方案中應明確統計檢驗假設，即評價考核試劑與對比試劑是否等效的標準。
6.結果差異樣本的驗證
在資料收集過程中，對於兩種試劑的檢測結果有明顯差異的樣本，應採用臨床上普遍認為質量較好的第三種同類試劑進行驗證試驗，同時結合患者的臨床病情對差異原因及可能結果進行分析。
7.臨床試驗總結報告撰寫
根據《體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則》的要求，臨床試驗報告應該對試驗的整體設計及各個關鍵點給予清晰、完整的闡述，應該對整個臨床試驗實施過程、結果分析、結論等進行條理分明的描述，並應包括必要的基礎資料和統計分析方法。建議在臨床總結報告中對以下內容進行詳述。
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