專業班次 11農學1班組別 201130010110
題目分光光度法測定食品中的亞硝酸鹽姓名梁志雄日期
一、 目的要求
了解並熟練掌握分光光度計的結構和使用方法；掌握比色法測定食品中亞硝酸鹽的原理和方法。
二、 實驗原理和技術
利用分光光度法測量亞硝酸鹽含量，樣品經過沉澱分離出蛋白質，除去脂肪後，在弱酸的條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸起重氮化反應，生成重氮化化合物，再與鹽酸萘乙二胺偶合，形成紫紅色染料，其顏色的深淺與亞硝酸鹽的含量成正比，在最大吸收波長538nm處測定其吸光度，服從朗伯比爾定律，通過標準曲線法可以計算出樣品中亞硝酸鹽的含量。﹙備註：朗伯比爾定律，a=k·c·l
三、 操作步驟
1、 配置標準系列吸取0.00ml 、0.40 ml 、 1.
20 ml 、1.60 ml 、 2.00 ml亞硝酸鈉標準使用液，分別置於25 ml的容量瓶中，分別加入2 ml對氨基苯磺酸溶液，均勻，靜置三到五分鐘後各加入1 ml鹽酸萘乙二胺溶液，加去離子水至刻度，混勻，靜置15分鐘，即可測定；
2、 繪製標準曲線試劑空白做參考調節零點，用1cm比色皿，將所配置的標準系列在538nm處依次測定其吸光度，繪製標準曲線；
3、 測定吸取十毫公升上述濾液於25ml容量瓶中，與標準系列一樣加入顯色劑，顯色劑與標準溶液一起進行測定，並在標準曲線上查出相應的亞硝酸鹽質量，計算樣品中其的含量。
4、 分光光度計的操作步驟
操作前預熱三十分鐘調波長到538nm 按下mode鍵讓「abs」亮放入參比和樣品測定參比時，按下0a/100%t 調零-0.000 記錄各個樣品的吸光度取出比色品洗乾淨。
四、 實驗現象
在加對氨基苯磺酸之前，比色管中的溶液都是無色的，當加入對氨基苯磺酸溶液之後，先前加入過亞硝酸苯磺酸標準使用液的比色管中的溶液呈現出紫紅色，且隨著亞硝酸鈉標準使用液體積的增加而顏色逐漸加深。
五、 實驗資料記錄和處理
1、2、從「分光光度法測定食品中的亞硝酸鹽線性分布圖」中得知，擬合的直線的線性方程為y=0.1477x+0.0078 擬合度r2=0.
9954 把樣品中的分光度代入得出樣品中亞硝酸鹽含量為4.102ug 故綜上樣品中亞硝酸鹽的濃度為0.4102/ml
六、 資料處理與分析
1、 實驗中亞硝酸鈉標準使用液應該準確加入，因為這些試劑是作為乙個標準，對於實驗中要測量的分光度有乙個決定性的影響；其次對於對氨基苯磺酸和鹽酸萘乙二胺溶液，則並不需要準確加入，但為了實驗效果，可以適量增加；
2、 實驗中當加入了對氨基苯磺酸溶液之後，一定要靜置3~5分鐘後才能加入鹽酸萘乙二胺溶液，經查閱資料可知，在正常情況下，亞硝酸鹽在酸性情況下，與對氨基苯磺酸發生重氮化反應生成重氮鹽，此重氮鹽再與鹽酸萘乙二胺試劑發生偶合反應，生成紫紅色偶氮化合物，其顏色與樣品中的亞硝酸鹽含量成正比，但是如果加入了對氨基苯磺酸後，提前加入鹽酸萘乙二胺試劑，則鹽酸萘乙二胺會與亞硝酸鹽反應，減少了亞硝酸鹽的含量，造成了實驗的誤差。
3、 在分光度測定的過程中，由於分光皿的吸光度的差異，會影響最終實驗結果，解決的辦法是先用蒸餾水做分光度實驗，了解每個分光皿的吸光度，在測量實驗樣品時，根據各個分光皿的差異對實驗資料進行合理的處理。
第五周實驗報告
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第五周上機實驗報告
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