圓二色譜法測蛋白二級結構

2021-03-03 23:54:00 字數 749 閱讀 4406

圓二色譜是一種特殊的吸收譜,它通過測量蛋白質等生物大分子的圓二色光譜,從而得到生物大分子的二級結構,簡單、快捷,廣泛應用在蛋白質摺疊,蛋白質構象研究,酶動力學等領域。

圓二色譜紫外區段(190-240nm),主要生色團是肽鏈,這一波長範圍的cd譜包含了生物大分子主鏈構象的資訊。α-螺旋構象的cd譜在222nm、208nm處呈負峰,在190nm附近有一正峰。β-摺疊構象的cd譜,在217-218nm處有一負峰,在195-198nm處有一強的正峰。

無規則捲曲構象的cd譜在198nm附近有一負峰,在220nm附近有一小而寬的正峰。

蛋白濃度與使用的光徑厚度和測量區域有一定關係,對於測量遠紫外區德氨基酸殘基微環境的蛋白而言,濃度範圍在0.1~1.0mg/ml,則光徑可選擇在0.

1~0.2cm之間,溶液體積則在200~500ul。而測量近紫外區的蛋白質**結構,所需濃度要至少比遠紫外區的濃10倍方能檢測到有效訊號,且一般光徑的選擇均在0.

2~1.0cm,相應的體積也需增加至1~2ml

緩衝液可選50~100mmol trs-hcl、pbs等,盡量除去edta。

遠紫外近紫外

二硫鍵一般都是不對稱的,它在圓二色性光譜上,於195-200nm和250-260處有譜峰

色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸殘基的側鏈其譜峰在230-310nm之間,色氨酸殘基側鏈的譜峰一般集中在290- 310nm之間,但有時也會向短波長方向移動從而與酪氨酸殘基側鏈的譜峰重疊

在250-260nm之間,苯環的譜峰又與二流鍵的譜峰重疊

溶液度吸收的影響