abo、rh-d血型鑑定操作規程
1.目的：規範abo、rh-d檢測的操作過程
2. 標本採集：靜脈採血2ml抗凝血,避免溶血試劑
3. 試劑：長春**生物技術有限責任公司
4.方法原理
【原理】:標準血清中的完全抗體(lgm)抗a、抗b、和抗d能和紅細胞表面相應的抗原在鹽水介質中發生特異性的凝集反應。根據紅細胞凝聚型別可鑑別出a、b、o、ab四型和rhd陰性或陽性。
5. 操作:
一、玻片法(一般只能做正定型)
【正定型】:
1、取一張玻片,用蠟筆或記號筆將其分為三等份,從左到右每一等份左上角標明a、b、d,
2、對應加入抗a和抗b抗d標準血清一滴;
3、分別加pc(患者10—15%紅細胞懸液);
4、用潔淨竹籤將試劑和紅細胞充分混勻,混合物約2cm2大小;
5、輕輕地連續傾斜轉動玻片2—5分鐘,觀察並記錄;
【解釋】:a端凝集為a型血;b端凝集為b型血;a、b端均凝集則為ab型;a、b端均不凝集則為o型;d端凝集則為rh陽性者,無凝集則為rh陰性。
備註:玻片法可作為abo血型初篩或複檢;不適用於抗體鑑定和交叉配血;不適合檢測abo亞型。
二、試管法(鹽水介質)
【原理】:標準的a型和b型紅細胞能和受檢者血清(血漿)中相應的抗體發生特異性結合,形成肉眼可見的凝集反應,從而可推斷出受檢者的血型。
【材料】:
1、標準a型和b型紅細胞懸液(濃度4%,商品有售,亦可自行新鮮配製);
2、受試者血清或血清;
3、潔淨康氏試管。
【正定型】:
1、取二支潔淨試管分別記上抗a和抗b;
2、對應加入抗a和抗b血清1滴;
3、分別加入病人紅細胞懸液1滴(濃度為2%-5%);
4、混勻,室溫放置5分鐘,1000rpm離心1分鐘,取出觀察結果
【解釋】:輕搖試管,檢查是否凝集,抗a、抗b管均凝集,受試者為ab型血;抗a、抗b管均不凝集,則為o型血;抗a管凝集則為a型血;抗b管凝集則為b型血。
【反定型】:
1、取二支試管分別記上ac和bc;
2、分別加入病人血清;
3、對應加入a和b型試劑紅細胞;
4、混勻室溫放置5分鐘,1000rpm離心1分鐘,取出觀察結果;
【解釋】:首先檢查上清液有無溶血,然後輕搖試管,檢查是否凝集,a、b管均凝集受試者為o型血;a、b管均不凝集則為ab型血;a管凝集則為b型血;b管凝集則為a型血。
3.卡式法(微柱凝膠技術)
【原理】:在含有中性膠的微柱管中相繼加入紅細胞抗體和紅細胞,孵育後相應的抗原和抗體則形成免疫複合物,利用凝膠分子排阻原理在一定的離心力下,該複合物不能通過凝膠間隙浮於膠表面或懸於膠中. 無相應的抗原和抗體,則不能形成免疫複合物, 在一定的離心力下,分散的紅細胞可以通過凝膠間隙沉於微柱腔底部。
可用於abo血型正反定型,rh血型檢測或其它應用完全性抗體的血型檢測。
【試劑】:血型檢測卡 abo試劑紅細胞
【正定型】:在含有紅細胞抗體的微柱凝膠管中加入待檢紅細胞, 孵育後離心觀察結果。分散的紅細胞可以通過凝膠間隙沉於微柱腔底部,凝集的紅細胞不能通過凝膠間隙浮於膠表面或懸於膠中。
【解釋】:抗a、抗b管均凝集(浮於膠表面或懸於膠中),受試者為ab型血;抗a、抗b管均不凝集(沉於微柱腔底部),則為o型血;抗a管凝集則為a型血;抗b管凝集則為b 型血。
【反定型】:將抗原吸附在紅細胞表面,檢測與其相應抗體發生的凝集反應。在abo血型反定型試驗中,將人a或b型血型多醣抗原經媒介化合物聯結到o型紅細胞上(可長期儲存),然後將該具有a型抗原或b型抗原紅細胞分別與被檢血清在微柱凝膠中反應,檢測被檢血清中abo抗體.
【解釋】:a、b管均凝集受試者為o型血(浮於膠表面或懸於膠中);a、b管均不凝集則為ab型血(沉於微柱腔底部);a管凝集則為b型血;b管凝集則為a型血。
交叉配血操作規程
交叉配血的目的是確保為病人選擇合適的血液和測定受試者血清中有無任何不規則的抗體,防止輸血後產生溶血性輸血反應。交叉配血有兩類即主側交叉、次側交叉,交叉配血實驗的結果,主側是絕對不可以有凝集和溶血現象,次側在a或b型人輸入o型血時,可以有凝集現象,但不可以有溶血現象。
一、鹽水交叉配血實驗(試管法)
【原理】:完全抗體(lgm)在鹽水介質中能和相應的抗原發生免疫反應,形成肉眼可見的凝集反應。
【試劑】:生理鹽水
【方法】:
1、用生理鹽水將受血者紅細胞製備2%-5%紅細胞懸液;
2、從供血者血液儲存袋上的辮子中獲取少量血樣,分離血清,生理鹽水三洗紅細胞,並用生生理鹽水將供血者紅細胞製備2%-5%的紅細胞懸液;
3、取潔淨塑料試管2支,標明「主側」「次側」;
4、按標記「主側」管加受血者血清2滴,加供血者紅細胞懸液1滴。「次側」管加供血者血清2滴,加受血者紅細胞懸液1滴。混勻。
以1000g(3400r/min)離心15秒,輕輕晃動試管,肉眼觀察結果
【解釋】:兩管無凝集,表明abo血型配血相合。該法主要用於檢出是否有abo血型定型錯誤,無法檢出由於免疫而產生的不完全抗體。
若不能明顯判定為陰性,可通過顯微鏡進一步判讀,鏡下無凝集為陰性。若在室溫下操作注意冷凝集影響試驗結果。
二、凝聚胺交叉配血法
【原理】:凝聚胺(polybrene)是一種大分子陽離子物質,溶解後產生很多正電荷,可以中和紅細胞表面的負電荷,使紅細胞發生非特異性凝聚,然後再加入解凝聚液(pesuspending)中和凝聚胺,使正常紅細胞重新解聚散開,此時實驗結果為陽性;若紅細胞被相應的抗體結合,凝聚就不會散開,實驗結果為陽性。
【材料】:
1、受、供血者血清或edta抗凝血漿;
2、受、供血者3—5%的紅細胞懸液;
3、凝聚胺試劑盒(包括低離子介質lim,凝聚胺溶液,重懸液)。
【方法】:
1、試管兩支,分別表明主、次側,主側加受血者血球或血漿2滴,供血者紅懸液1滴,次側管反之;
2、立即以1000g離心,觀察結果。若陰性則繼續試驗;若陽性則需分析原因排除干擾後繼續後續試驗。
3、各加低離子液(lim)0.6ml混勻,室溫放置1min。
4、再各加凝聚胺溶液2滴;立即以1000g離心1min,棄去試管中液體,輕搖試管觀察紅細胞凝集情況。若有凝集出現則繼續操作,若沒有凝集出現則該試驗無效。
5、加入1滴重懸液,輕搖試管,肉眼觀察結果。
【解釋】1min內凝集消失為聚凝胺試驗陰性,1min內凝集不消失為聚凝胺試驗陽性。該法簡便、快速、靈敏度高、**適中,且不需特殊裝置。該法除交叉配血外,還可用於血型鑑定,不完全抗體篩選等。
非常適合於基層醫院選用。加入重懸液後應盡快觀察結果以免弱反應消失。
三、卡式配血(微柱凝膠技術)
【原理】:微柱凝膠技術是利用抗原抗體反應與凝膠分了篩技術相結合的產物.通過調節葡聚醣凝膠的濃度來控制分子篩孔徑的大小,使分子篩只允許游離紅細胞通過,從而達到分離凝集紅細胞和游離紅細胞的目的。
即:將紅細胞和血清加在凝膠的上部反應,離心以後,凝集紅細胞將受到凝膠的阻礙而停留在凝膠的上部或凝膠中,則證明發生凝集反應,可判為凝集反應陽性,反之,所有紅細胞都停留在凝膠底部,證明未發生凝集反應,則可判為凝集反應陰性。（共八管）
【材料】:
1、受、供血者血清或edta抗凝血漿;
2、受、供血者3—5%的紅細胞懸液;
3、抗人球蛋白交叉配血卡;
abd血型鑑定：（a b rh三個管）
【方法】：
1、向a、b、d三個管中滴1滴受血者紅細胞懸液。
2、37℃孵育15分鐘。
3、離心10分鐘,判斷結果。
②不規則抗體操作（ⅰ、ⅱ、ⅲ三個管）
【原理】:選擇已知抗體篩查細胞抗原來檢測血清中的抗體,用凝膠微柱可清晰地顯示出來。
【材料】:
1、抗體篩查細胞（標準a、b、o細胞懸液）。
2、受檢者血清;
【方法】:
1.三管中分別加入抗體篩查ⅰ、ⅱ、ⅲ細胞各50ul。
2.三管中均加入25ul待檢樣本血漿或血清
3.37℃孵育15分鐘。
4.離心,判斷結果。
【解釋】:如在第二管**現陽性反應,而第一管**現陰性反應,或者與第二管陽性反應比呈明顯的弱陽性反應,提示該待檢血清中存在該細胞特異性抗體;如兩管都出現陰性反應,提示該待檢血清中不含該細胞特異性抗體。
③交叉配血（主次側兩個管）
【方法】:1.主側管中加入50ul獻血者紅細胞懸液、25ul受血者血漿或血清。
2.次側管中加入50ul受血者紅細胞懸液、25ul獻血者血漿或血清。
3.37℃孵育15分鐘。
4.離心10分鐘,判斷結果。
【解釋】:主側、次側血球沉底,表明abo血型為配血相合。
S014交叉配血試驗標準化操作規程 聚凝胺法
一 目的 為保證臨床輸血的相容性，確保臨床輸血安全，對全血 紅細胞懸液 洗滌紅細胞 濃縮紅細胞 少白細胞紅細胞 冰凍紅細胞 機採濃縮白細胞懸液等血液成分進行交叉配血試驗。二 方法 採用聚凝胺介質試管法 三 原理 聚凝胺法第一步採用低離子強度溶液降低紅細胞和抗體反應介質的離子強度，從而減少了紅細胞周圍...
科技成果鑑定操作規程
一 鑑定條件 申請科技成果鑑定，應具備下列條件 1.已完成合同的約定或者計畫任務書規定的任務 2.不存在科技成果完成單位或者人員名次排列異議的權屬方面的爭議 3.技術資料齊全，並符合檔案管理部門的要求 二 鑑定程式 1 完成單位提交 科技成果鑑定申請表 及相關鑑定材料。2 縣科技局提出初審意見，形成...
科技成果鑑定操作規程
一 鑑定條件 申請科技成果鑑定，應具備下列條件 1.已完成合同的約定或者計畫任務書規定的任務 2.不存在科技成果完成單位或者人員名次排列異議的權屬方面的爭議 3.技術資料齊全，並符合檔案管理部門的要求 二 鑑定程式 1 完成單位提交 科技成果鑑定申請表 及相關鑑定材料。2 縣科技局提出初審意見，形成...