一、目的
為保證臨床輸血的相容性,確保臨床輸血安全,對全血、紅細胞懸液、洗滌紅細胞、濃縮紅細胞、少白細胞紅細胞、冰凍紅細胞、機採濃縮白細胞懸液等血液成分進行交叉配血試驗。
二、方法
採用聚凝胺介質試管法;
三、原理
聚凝胺法第一步採用低離子強度溶液降低紅細胞和抗體反應介質的離子強度,從而減少了紅細胞周圍的陽離子雲,促進帶正電荷的igg抗體與帶負電荷的紅細胞發生反應,這樣大大加快了抗原和抗體反應的速率。第二步通過加入聚凝胺來促使紅細胞產生可逆性的非特異性凝聚。聚凝胺是一種多價陽離子溴化己二甲胺多聚物,可以中和紅細胞表面的負電荷,使紅細胞的zeta電位降低,從而產生紅細胞可逆性的聚集,縮短紅細胞之間的距離,讓igg抗體可直接引起紅細胞凝聚。
第三步加入重懸液,重懸液可中和聚凝胺的作用。可區分由聚凝胺誘發的紅細胞之間的非特異性凝聚與由抗原抗體反應所致的特異性凝聚。
四、適用範圍
適用於輸血前需進行交叉配血試驗的血液及血液成分。
五、儀器裝置
普通離心機;血型專用離心機;
六、試劑
1、試劑名稱:快速聚凝胺試劑盒
2、試劑生產廠家:珠海貝索生物技術****;
3、批准文號:國食藥監械(準)字2009第3400076號;
4、包裝規格(盒):
4.1低離子強度溶液(lim49ml×2;
4.2聚凝胺溶液(polybrene solution) 15ml×1;
4.3重懸液(resuspending solution) 15ml×1;
4、貯藏條件;2-8℃避光儲存。
5、有效期:自檢定合格之日起2年;
七、檢測樣本要求
1、標本型別:靜脈血(edta抗凝劑:血液=1:10)。
2、標本採集:見輸血科標本管理標準化操作規程。
3、標本儲存和運輸:新鮮血2~8℃貯存時間不超過72小時。
4、標本拒收狀態:標識不準確、標本稀釋、細菌汙染,嚴重溶血等不能測定。
八、操作步驟
1、收集標本,嚴格進行查對無誤後,分離血清(漿)。
2、取10mmx60mm潔淨小試管2支,分別標明主(次)側管。
3、主(次)側管加入受(供)血者血清(漿)1滴,加供(受)血者3-5%紅細胞懸液1滴。
4、向各管加低離子強度溶液0.7ml,混勻,靜置30-60秒;
5、向各管加聚凝胺溶液1滴,混勻,3000r/min離心15秒,輕輕搖均,肉眼可見明顯的凝集狀(如無凝集須重做);
6、向各管中加重懸液1滴於管底,輕輕搖起觀察結果。1分鐘內凝集消失呈均勻混懸液,如反應很弱,應鏡下觀察並與陰性對照比較。鏡下無凝集紅細胞為陰性, 1分鐘內凝集不消失,既為陽性,
7、陰性結果表明受血者與獻血者血型相合;陽性結果表明受血者與獻血者血型不相合
九、質量控制
1、此檢測專案應參加衛生部臨床檢驗中心組織的室間質評,且成績合格;
2、每日做室內質量控制,且要求在控。
3、嚴格執行查對制度,判斷結果後應仔細核對、記錄,避免筆誤等引起的差錯。
4、交叉配血標本應在2~8℃儲存留一周,以備複查。
十、生物參考區間
相合,不相合。
十一、注意事項與干擾因素
1、本方法可結合鹽水介質交叉配血相合後進行臨床發血。
2、交叉配血標本必須正確有標識,其血液量、紅細胞或血漿的質量符合實驗要求和受血者當前的免疫學狀態;
3、交叉配血試驗血樣要求是輸血前3天內的血樣(預防受血者在輸血前的3個月之內可能有妊娠或輸血等免疫史而可能產生不規則抗體)。
4、標本血液離體後要求盡快送檢,至檢測完畢最長不能超過3d,每次檢測後受血者和供血者的血標本應在2℃~8℃儲存7天;
5、試劑使用前應仔細檢查試劑的貯存條件是否符合要求、是否變質失效;
6、患者使用的藥物影響的處理:如果使用右旋糖酐、pvp等**,應注意將紅細胞洗滌;如果受者使用肝素**,則應用硫酸魚精蛋白對抗,使樣本凝結;
7、交叉配血試驗不相合時應注意紅細胞緡錢狀的假陽性鑑別,可結合鹽水介質交叉配血試驗鏡下觀察或離心去上清液後重懸觀察。
8、抗體篩選試驗陰性,而交叉配血結果陽性,提示有未檢測明的同種抗體存在。
9、交叉配血結果不相合提示有未查明的同種抗體存在。
10、注意交叉配血試驗過程中離心力、溫度、紅細胞濃度、抗原抗體的比例;
11、血清或血漿中如含有溶血性抗體,則相應紅細胞被溶解而不凝集,交叉配血結果陽性,如排除標本中補體干擾因素的影響,可來活後重新試驗。
12、注意在室溫反應中或抗球蛋白試驗中顯示有自身抗體,應加做自身對照試驗或直接抗人球蛋白試驗加以鑑別。
十二、參考文獻
1、胡麗華主編,臨床輸血檢驗,第1版。中國醫藥科技出版社,2004;
2、葉應嫵,等主編,全國臨床檢驗操作規程,第3版。東南大學出版社,2006,11;
3、安萬新主編,輸血技術學,第1版.科學技術文獻出版社,2006,9;
4、聚凝胺試劑盒說明書。