人和肽素 CPP 酶聯免疫檢測說明書

2022-09-26 00:48:04 字數 1900 閱讀 2437

試劑盒使用說明書

使用前仔細閱讀本說明書。本酶聯免疫試劑盒是基於生物素雙抗體夾心技術原理,來檢測人和肽素(cpp)),只能用於研究用途,不得用於醫學診斷。

用途: 用於人血清、血漿及相關液體樣本中和肽素(cpp)的測定。

工作原理

本試劑盒採用的是生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法(elisa)測定樣品中人和肽素(cpp)的水平。向預先包被了人和肽素(cpp)單轉殖抗體的酶標孔中加入和肽素(cpp),溫育;溫育後,加入生物素標記的抗cpp抗體,再與鏈黴親和素-hrp結合,形成免疫複合物,再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶,然後加入底物a、b,產生藍色,並在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺與樣品中人和肽素(cpp)的濃度呈正相關。

試劑盒組成

需要而未提供的試劑和器材

1. 37℃恆溫箱。

2. 標準規格酶標儀。

3. 精密移液器及一次性吸頭

4. 蒸餾水,

5. 一次性試管

6. 吸水紙

注意事項

1. 從2-8℃取出的試劑盒,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開封後如未用完,板條應裝入密封袋中儲存。

2. 各步加樣均應使用加樣器,並經常校對其準確性,以避免試驗誤差。

3. 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。

4. 為避免交叉汙染,要避免重複使用手中的吸頭和封板膜。

5. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

6. 底物b對光敏感,避免長時間暴露於光下。

洗板方法

手工洗板方法:甩掉酶標板內的液體;在實驗台上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內,浸泡1-2分鐘。根據需要,重複此過程數次。

自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用後再用到正式實驗過程中。

標本要求

1.不能檢測含nan3的樣品,因nan3抑制辣根過氧化物酶的(hrp)活性。

2.標本採集後盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放於-20℃儲存,但應避免反覆凍融

操作程式

1. 標準品的稀釋:(本試劑盒提供原倍標準品一支,使用者請按照說明自行在小試管中倍比稀釋):

2. 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。

3. 加樣:1)空白孔:空白對照孔不加樣品,生物素標記的抗cpp抗體,鏈黴親和素-hrp,只加顯色劑a&b和終止液,其餘各步操作相同;2)標準品孔:

加入標準品50μl,鏈黴素-hrp50μl(標準品中已事先整合好生物素抗體,故不加);3)待測樣品孔:加入樣本40μl,然後各加入抗- cpp抗體10μl、鏈酶親和素-hrp50μl,蓋上封板膜,輕輕振盪混勻,37℃溫育60分鐘。

4. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋後備用。

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩乾,每孔加滿洗滌液,靜置30秒後棄去,如此重複5次,拍乾。

6. 顯色:每孔先加入顯色劑a 50μl,再加入顯色劑b 50μl,輕輕**混勻,37℃避光顯色10分鐘。

7. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

8. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(od值)。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行。

9.根據標準品的濃度及對應的od值計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據樣品的od值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟體來計算。

操作程式總結:

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檢測範圍:5ng/l→1500ng/l。

規格: 48t/盒

儲存: 2-8℃

有效期: 6個月(2-8℃)。

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