高解析度溶解曲線和TEALTIMEPCR

目前，有不少人把高解析度熔解曲線(hrm)和real-time的熔解曲線混為一談，只要一聽到熔解曲線4個字就和螢光定量聯絡在一起了，再加上現在市面上有些儀器兼具螢光定量和hrm的功能，使一些同行更加迷惑。今天去給大家講一下兩者之間的區別。（一）.

兩者的原理

hrm：不同核酸分子的片段長短、 gc 含量、 gc 分布等是不同的，因此任何雙鏈 dna 分子在加熱變性時都會有自己熔解曲線的形狀和位置。 hrm 技術的基本原理就是在pcr反應之前加入飽和染料，在pcr反應之後進行公升溫變性，採集螢光訊號，根據熔解曲線的不同即tm值的不同來對樣品來進行區分。

real-time：是指在pcr反應體系中加入螢光基團，利用螢光訊號積累實時監控整個pcr程序，最後通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。

（二）.兩者的採集過程

hrm：高解析度熔解曲線（hrm）是在pcr反應之後，對pcr產物進行公升溫變性，採集螢光訊號的變化，繪製成不同形狀的曲線。

real-time：是在pcr過程中採集螢光訊號。

（三）.兩者的應用

hrm：篩查未知突變和針對已知位點進行基因分型。基因分型的方法為非標記探針法和小片段法。

real-time：定量及基因分型。基因分型的方法是：taqman探針，水解探針等。

（四）.基因分型方法的費用

hrm基因分型方法的費用遠低於taqman探針和水解探針。

（五）.兩者所用的染料

hrm：lc green飽和染料，能與dna雙鏈的鹼基緊密結合，不抑制pcr反應，在pcr反應過程中是過飽和的狀態。

real-time：sybr green不飽和染料，不能與dna雙鏈的鹼基緊密結合，濃度高時會抑制pcr反應，只能少量加入。

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