時間分辨螢光免疫測定（trfia）是一種非同位素免疫分析技術，它用鑭系元素標記抗原或抗體，根據鑭系元素螯合物的發光特點，用時間分辨技術測量螢光，同時檢測波長和時間兩個引數進行訊號分辨，可有效地排除非特異螢光的干擾，極大地提高了分析靈敏度。 （一）trfia分析原理在生物流體和血清中的許多複合物和蛋白本身就可以發螢光，因此使用傳統的發色團進而進行螢光檢測的靈敏度就會嚴重下降。大部分背景螢光訊號是短時存在的，因此將長衰減壽命的標記物與時間分辨螢光技術相結合，就可以使瞬時螢光干擾減到最小化。
時間分辨螢光分析法（trfia）實際上是在螢光分析（fia）的基礎上發展起來的，它是一種特殊的螢光分析。螢光分析利用了螢光的波長與其激發波長的巨大差異克服了普通紫外-可見分光分析法中雜色光的影響，同時，螢光分析與普通分光不同，光電接受器與激發光不在同一直線上，激發光不能直接到達光電接受器，從而大幅度地提高了光學分析的靈敏度。但是，當進行超微量分析的時候，激發光的雜散光的影響就顯得嚴重了。
因此，解決激發光的雜散光的影響成了提高靈敏度的瓶頸。 解決雜散光影響的最好方法當然是測量時沒有激發光的存在。但普通的螢光標誌物螢光壽命非常短，激發光消失，螢光也消失。
不過有非常少的稀土金屬（eu、tb、**、dy）的螢光壽命較長，可達l～2ms，能夠滿足測量要求，因此而產生了時間分辨螢光分析法，即使用長效螢光標記物，在關閉激發光後再測定螢光強度的分析方法。 平時常用的稀土金屬主要是eu（銪）和tb（鋱），eu螢光壽命lms，在水中不穩定，但加入增強劑後可以克服；tb螢光壽命l.6ms，水中穩定，但其螢光波長短、散射嚴重、能量大易使組分分解，因此從測量方法學上看tb很好，但不適合用於生物分析，故eu最為常用。
（二）時間分辨訊號原理普通物質螢光光譜分為激發光譜和發射光譜，在選擇螢光物質作為標記物時，必須考慮激發光譜和發射光譜之間的波長差，即stakes位移的大小。如果stakes位移小，激發光譜和發射光譜常有重疊，相互干擾，影響檢測結果的準確性。鑭系元素的螢光光譜有較大的stakes位移，最大可達290nm，激發光譜和發射光譜間不會相互重疊，加上其發射的光譜訊號峰很窄，螢光壽命長，銪的螢光壽命可達730us，檢測中只要在每個激發光脈衝過後採用延緩測量時間的方式，待短壽命的背景螢光衰變消失後，再開啟取樣門儀器記錄長壽命銪鰲合物發射的特異性螢光，可以避免本底螢光干擾，提高檢測的精密度。
trfia的測量儀器是時間分辨螢光計，由三大部分組成：光源：脈衝光源：
氙燈（每秒閃爍l000次）；小型n2雷射器；輸出脈衝波長：337nm螢光訊號獲取系統；資料處理系統。 （三）解離增強原理解離增強鑭系元素螢光免疫分析（delfia）是時間分辨螢光免疫分析中的一種。
它用具有雙功能基團結構的螯合劑，使其一端與銪（eu）連線，另一端與抗體／抗原分子上的自由氨基連線，形成eu標記的抗體／抗原，經過免疫反應之後生成免疫複合物。由於這種複合物在水中的螢光強度非常弱，因此加入一種增強劑，使eu3+從複合物上解離下來，自由eu3+同增強劑中的另一種螫合劑螯合形成一種膠態分子團，這種分子團在紫外光的激發下能發出很強的螢光，訊號增強了百萬倍。因為這種分析方法使用了解離增強步驟，因此稱為解離增強鑭系元素螢光免疫分析。
這是目前在時間分辨螢光免疫分析中應用最多的一種分析系統。 （四）tr-fia應用 1.激素：
甲狀腺激素、甾體類激素。 2.病毒性肝炎標誌物。
3.腫瘤相關抗原。 4.
藥物。 5.多肽類。
時間分辨螢光免疫分析理論學習
第一節 trfia的技術原理 圖一 波長分辨圖二 時間分辨 圖三 時間分辨螢光免疫反應圖示 第二節 trf的特點和優勢 由於時間分辨螢光免疫分析獨特的技術原理，有區別於傳統的免疫標記技術的特點和優勢，已被人們廣泛接受，國內外已有大量文獻報道。與現在廣泛使用的放射免疫分析 ria 酶免疫分析 eia ...
化學發光免疫技術與時間分辨技術的異同點
概念化學發光免疫分析 chemiluminescenceimmunoassay,clia 是將具有高靈敏度的化學發光測定技術與高特異性的免疫反應相結合，用於各種抗原 半抗原 抗體 激素 酶 脂肪酸 維生素和藥物等的檢測分析技術。是繼放免分析 酶免分析 螢光免疫分析和時間分辨螢光免疫分析之後發展起來的...
時間分辨光譜技術
時間分辨光譜技術 trs 慧聰網2005年11月30日9時4分評論0條進入論壇 激發時，每次放電的電流波形和 時間視窗當分析 即光被積分的時間段 與每個元素的分析靈敏度有極大的關係。根據放電時的電流波形，選擇適當的trs視窗位置，可以 1 避開放電初始階段產生背景的高峰電流，2 確定具有最佳信背比的...