實驗3根系活力的測定 TTC法

2022-10-06 07:30:02 字數 1451 閱讀 2106

植物根系是活躍的吸收器官和合成器官,根的生長情況和活力水平直接影響地上部的生長和營養狀況及產量水本。本實驗練習測定根系活力的方法,為植物營養研究提供依據。

一、實驗目的

熟悉測定根系活力的方法和原理

二、 原理

氯化三苯基四氮唑(ttc)是標準氧化電位為80mv的氧化還原色素,溶於水中成為無色溶液,但還原後即生成紅色而不溶於水的三苯甲腙,生成的三苯甲腙比較穩定,不會被空氣中的氧自動氧化,所以ttc被廣泛地用作酶試驗的氫受體,植物根系中脫氫酶所引起的ttc還原,可因加入琥珀酸,延胡索酸,蘋果酸得到增強,而被丙二酸、碘乙酸所抑制。所以ttc還原量能表示脫氫酶活性並作為根系活力的指標。

三、材料、裝置儀器及試劑

1、材料:水培或砂培小麥、玉公尺等植物根系。

2、儀器裝置:分光光度計;分析天平(感量0.1mg);電子頂載天平(感量0.

1g);溫箱; 研缽; 三角瓶50ml;. 漏斗;. 量筒100ml; 吸量管10ml;.

刻度試管10ml;. 試管架; 容量瓶10ml;. 藥勺;.

石英砂適量;. 燒杯10ml、1000ml。

3、試劑: 乙酸乙酯(分析純)。次硫酸鈉(na2s2o4),分析純,粉末。.

1%ttc溶液準確稱取ttc1.0g,溶於少量水中。定容到100ml。

用時稀釋至各需要的濃度。磷酸緩衝液(1/15mol/l,ph7)。. 1mol/l硫酸用量筒取比重1.

84的濃硫酸55ml,邊攪拌邊加入盛有500ml蒸餾水的燒杯中,冷卻後稀釋至1000ml。. 0.4mol/l琥珀酸稱取琥珀酸4.

72g,溶於水中,定容至100ml即成。

四、實驗步驟

1、ttc標準曲線的製作取0.4%ttc溶液0.2ml放入10ml量瓶中,加少許na2s2o4粉搖勻後立即產生紅色的甲月替。

再用乙酸乙酯定容至刻度,搖勻。然後分別取此液0.25ml、0.

50ml、1.00ml、1.50ml、2.

00ml置10ml容量瓶中,用乙酸乙酯定容至刻度,即得到含甲月替25μg、50μg、100μg、150μg、200μg的標準比色系列,以空白作參比,在485nm波長下測定吸光度,繪製標準曲線。

2、稱取根尖樣品0.5g,放入10ml燒杯中,加入0.4%ttc溶液和磷酸緩衝液的等量混合液10ml,把根充分浸沒在溶液內,在37℃下暗保溫1~3h,此後加入1mol/l硫酸2ml,以停止反應。

(與此同時做一空白實驗,先加硫酸,再加根樣品,其他操作同上)。

3、把根取出,吸乾水分後與乙酸乙酯3~4ml和少量石英砂一起在研缽內磨碎,以提出甲月替。紅色提取液移入試管,並用少量乙酸乙酯把殘渣洗滌

二、三次,皆移入試管,最後加乙酸乙酯使總量為10ml,用分光光度計在波長485nm下比色,以空白試驗作參比測出吸光度,查標準曲線,即可求出四氮唑還原量。

五、結果計算

四氮唑還原強度(mg/g(根鮮重)/h)=四氮唑還原量(mg)/[根重(g)×時間(h)]

六、實驗作業

七實驗總結及思考