摘要:三聚氰胺是一種用途十分廣泛的有機化工產品,由於其含氮量高達66%,因此近年來被不法商家利用。國內外三聚氰胺的分析方法很多,本文綜述了三聚氰胺的各種檢測方法,並且比較了不同方法的優缺點及其實用性,意在找出最快速、便捷、成本低的檢測方法。
關鍵詞:三聚氰胺檢測食品方法
三聚氰胺作為一種重要的化工原料,常用於製造三聚氰胺樹脂該物質,是建築業中常用的防火阻燃燃料[1]。三聚氰胺既不是食品原料,也不是食品新增劑,但與蛋白質相比其含氮量更高,並且**較蛋白質便宜很多,因此一些不法商家將其新增在食品或飼料中,鑽國家目前蛋白質檢測方法的空子,以形成產品中蛋白質含量高的假象[2],從而獲得更高的利益。這種手段造成了極其惡劣的社會影響,也給國家帶來了嚴重的經濟損失。
如今三聚氰胺的分析檢測問題已成為乙個熱點問題,受到廣泛的關注。本文對三聚氰胺的各種檢測方法進行歸納總結,為三聚氰胺的快速檢測提供理論依據。
近幾年三聚氰胺的檢測方法發展迅速,已經由早期的苦味酸法和昇華法到後來的高效液相色譜法、液相色譜法-質譜聯用法、氣相色譜-質譜聯用法,到現在的酶聯免疫法、金奈米粒子光度法和膠體金免疫層析法等。三聚氰胺的分析檢測方法在儀器上不斷提高,在精確度上也是逐步提公升,時間上不斷縮短。
1 重量法
重量法包括苦味酸法和昇華法,其反應原理簡單,但精確度不高。
苦味酸法方法原理是將水加入試樣,加熱溶解後,加人苦味酸溶液,稱量所生成的苦味酸三聚氰胺沉澱的質量,即測得三聚氰胺純度含量。昇華法測定原理是在昇華裝置中將試樣在負壓下進行加熱,讓三聚氰胺完全昇華後,稱其殘渣量,即測得三聚氰胺純度[3]。
2 高效液相色譜法(hplc)
國家標準gb/t 22400-2008[4]公布了原料乳中三聚氰胺快速檢測的高效液相色譜法,採用乙腈作為原料乳中的蛋白質沉澱劑和三聚氰胺提取劑,0.2μm微孔濾膜過濾後供hplc測定。採用紫外/二極體陣列檢測器檢測,該方法的檢出限為0.
05 mg/kg,重複性好,再現性強。
王輝等[5]建立用高效液相色譜-二極體陣列法測定高蛋白食品中的三聚氰胺的檢測方法。對不同樣品採用不同的前處理方法,流動相為0.02 mol/l硫酸銨∶甲醇=94∶6(v∶v),二極體陣列檢測器於235 nm波長下進行檢測,並以保留時間和三維光譜圖相似性係數進行定性,外標法定量。
不同樣品的加標**率98.8%～101.5%,rsd小於1.
2%。方法線性範圍為0.1～150μg/ml,檢測限為0.
01μg/ml,相關係數r=0.9999。張美金[6]等人建立了採用hplc檢測寵物食品和飼料中的三聚氰胺,得出最低檢測限位1.
0 mg/kg,加標**率為80%～110%,rsd<10％。
3 液相色譜-質譜聯用法(hplc-ms)
該檢測方法檢測過程很簡單,靈敏度高,最重要的是它可以不需要標準品就可以進行定性和定量分析。
欒偉[7]建立了液相色譜-串聯質譜(lc-ms/ms)用於寵物食品中三聚氰胺檢測的方法,並將其與美國食品藥品監督管理局us fda公布的氣相色譜-質譜和液相色譜方法進行了對比,結果發現lc-ms/ms的方法,前處理過程簡單,是一種高靈敏度、高選擇性的分析方法。
李愛軍[8]等應用液相色譜-串聯質譜法測定飼料中三聚氰胺殘留,試樣提取後,供液相色譜-串聯質譜儀定性定量分析。採用電噴霧離子源,定性離子對為127.2/85.
2和127.2/68.2;定量離子對為127.
2/85.2。在新增了0.
5～10.0 mg/kg的三聚氰胺標準品時的**率為92.6%～103.
2%,相對標準偏差在0.8%～2.0%,檢出限為0.
2 mg/kg。
4 氣相色譜-質譜聯用法(gc-ms)
氣相色譜-質譜聯用法就是進樣後利用氣相色譜將各物質分離,定性的測定三聚氰胺,再用質譜的方法測定該成分的分子量從而確定該物質的存在。婁大偉[9]等利用三乙胺、水、甲醇超聲萃採樣品中的三聚氰胺,結合氣相色譜-質譜法對奶粉中三聚氰胺進行測定。使用三乙胺/去離子水/甲醇混合液對奶粉中的三聚氰胺進行提取後,進一步採取矽烷化衍生法,有效地去除了基質所帶來的干擾,而在前處理中加入苯代三聚氰胺做內標,顯著地提高了方法的精密度。
5 酶聯免疫法
利用抗原與抗體的高特異性反應,通過合適的載體,使酶標抗原或抗體與待測樣品反應,形成酶標抗原抗體複合物,在相應的酶底物參與下,複合物上的酶催化底物使之水解成有色物質。一定條件下,呈色物質與待測物的含量直接相關,因此可以根據呈色物質顏色的深淺,對待測樣品進行定性定量分析。
陳俊峰[10]等將標準液和待測液置於酶聯免疫試劑盒中振盪反應一段時間後,將混合液用酶標儀在雙波長450 nm、630 nm下檢測吸光度。試驗結果表明使用酶聯免疫吸附法進行三聚氰胺的含量測定,具有快速、簡便、準確、靈敏度高等特點。但是此法對與三聚氰胺結構相似的也有一定程度的交叉反應,導致測得的結果偏高,因此一旦出現陽性樣品還需要用gc-ms法加以確定,而且此法受溫度影響較大。
6 金奈米粒子光度法
2023年,曾國平[11]等報道在pbs緩衝體系中,金奈米粒子與三聚氰胺形成粒徑較大的聚集體,導致共振瑞利散射強度顯著增強。在一定條件下,散射強度與三聚氰胺濃度成正比,由此建立了以金奈米粒子作光譜探針檢測鮮牛奶中三聚氰胺的新方法。在優化的實驗條件下,三聚氰胺的檢出限為2.
7×10-8 mol/l,本方法金奈米粒子無需修飾,在體系中僅加入一定量的單鏈寡聚核苷酸,實驗表明該方法具有簡便、快速、靈敏度高及選擇性好等特點。2023年,孫海燕[12]等報道以金奈米粒子作為比色探針,建立了快速檢測牛奶和雞蛋中三聚氰胺的方法,該方法的加標**率為95.0%～105.
0%。7 膠體金免疫層析法
膠體金免疫層析法是近10年發展起來的一項新技術,它是基於抗原抗體的特異性反應,用膠體金作為標記物。該方法操作簡單、快速、特異靈敏,不需要儀器,不需專業技術人員操作,幾分鐘內即可通過目視判斷檢測結果,並可保持檢測結果,比酶聯免疫吸附法操作更簡單,更適合在現場應用。2023年,周彤[13]等人採用戊二醛法製備三聚氰胺-bsa偶聯抗原,膠體金標記三聚氰胺單轉殖抗體,建立了檢測三聚氰胺的膠體金免疫層析試驗。
結果顯示,該試驗具有良好的敏感性,膠體金免疫層析試驗對鮮奶、奶粉和飼料樣品中三聚氰胺的最低檢測量分別為1.0、2.0和2.
5μg/g,該法適合現場快速檢測三聚氰胺。
8 結語
理想的分析技術應該滿足以下條件:高靈敏度或低檢測限,高度專一,分析時間短,成本低廉,便捷易攜帶,少量或不用預處理程式,適合複雜基質測定。由於三聚氰胺對食品安全構成的威脅,迫切要求開發更快速、低成本的檢測方法,筆者全面分析了目前食品中三聚氰胺的檢測方法,膠體金免疫層析法具有操作簡單、快速、特異靈敏,不需要儀器,可以廣泛地應用於實際生活。
參考文獻
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