浙江查滅殘存釘螺技術方案 浙江血吸蟲病防治中心

2023-02-14 19:57:02 字數 4931 閱讀 6525

浙江省查治血吸蟲病技術方案

(修訂稿)

浙江省2023年達到血吸蟲病傳播阻斷標準,但目前部分地區尚有殘存釘螺,輸入性傳染源時有發現,存在著血吸蟲病重新流行的威脅。為鞏固血防成果,根據《浙江省血吸蟲病監測鞏固方案(2023年修訂版)》,結合我省血吸蟲病防治現狀,特修訂本方案。

1 查病物件

1.1 內源性傳染源當年查到釘螺自然村,對6歲以上人群和全部放養的牛、羊、豬等家畜普查1次;連年查到釘螺的村,每3年普查1次;查到感染性釘螺的村每年普查1次,連續3年;其他地區應結合門診和各種體檢開展傳染源監測。

1.2 外源性傳染源

1.2.1 範圍有殘存釘螺分布的鄉(鎮、街道);歷史血吸蟲病流行鄉(鎮、街道);其他有條件的地區。

1.2.2 物件來自或往返於湖南、湖北、江西、安徽、江蘇、四川、雲南等省份尚未達到血吸蟲病傳播阻斷縣和疫情回公升縣人群及家畜,重點是漁民、船民、水產養殖、學生等人員,從疫區抗洪搶險歸來人員等。

2 血清學檢查

2.1 人群血清學檢查採用間接紅細胞凝集試驗(iha)、斑點金免疫滲濾試驗(digfa)、乳膠微球免疫層析試驗(dlia)和酶聯免疫吸附試驗(elisa),可根據情況任選1種。

2.1.1 間接紅細胞凝集試驗(iha)

基本原理:可溶性血吸蟲蟲卵抗原吸附於紅細胞表面,使紅細胞致敏。致敏紅細胞表面吸附的抗原與待檢血清中特異性抗體相結合,使紅細胞被動地凝集起來,肉眼可見。

操作方法:①在「v」型微量血凝反應板的第1孔中加生理鹽水100μl,第2、3孔中各加25μl;②第1孔中加待檢血清25μl,混勻後吸出25μl加入第2孔中,在第2孔中混勻後吸出25μl加入第3孔中,混勻後棄去25μl,此時第1、2、3孔中的血清稀釋度依次為1:5、1:

10、1:20;③第2、第3孔各加致敏紅細胞懸液25μl,將反應板放在振盪器上振盪1 min,室溫下靜置45 min,觀察反應結果。

結果判斷:①陰性反應:紅細胞全部下沉在凹底部,形成緊密的圓點,周圍整齊清晰;②陽性反應:

待檢者血清以1:10稀釋度出現凝集反應為陽性起點。反應強度:

「+多數紅細胞下沉在底部形成圓點,周圍可見少量凝集紅細胞;「+凹底部可見明顯的紅點,凝集紅細胞在底部形成小薄層;「+凹底部可見很弱的紅點,紅細胞呈疏鬆的顆粒凝集紅細胞呈明顯的顆粒凝集,均勻散布於凹底部周圍形成薄層,有時呈皺褶狀。

注意事項:①診斷試劑應儲存在4℃,有效期12個月;②每次試驗應作陽性血清、陰性血清及生理鹽水對照,陽性血清效價達到1:1 280以上,試劑方可使用;③所用毛細吸管應校正至每滴等於25μl(即1ml為40滴);④反應板選擇「v」型,底角應為90°;⑤反應板使用後,用自來水反覆沖洗乾淨,再用蒸餾水沖洗2次,晾乾即可,切勿用化學洗滌劑清洗。

2.1.2 斑點金免疫滲濾試驗(digfa)

基本原理:受檢血清中的特異性抗體與硝酸纖維素膜上的血吸蟲抗原通過滲濾逐步反應,形成抗原-抗體複合物。滴入金標記抗人igg結合物,使與抗原-抗體複合物結合,出現紅色斑點。

操作方法:①在小盒**孔膜上加a液(ph7.4 pbs-tween20)2滴(100μl),待滲入;②加受檢血清25μl,待滲入;③加a液2滴,待滲入;④加b液(金標記抗人igg)1滴(50μl),待滲入;⑤加入a液2滴,待滲入,觀察結果。

結果判斷:膜上顯現紅色斑點為陽性,否則為陰性。

注意事項:①每批試劑盒內,均設質控小盒,操作方法同上,但不加血清;②試劑應置4℃儲存,有效期6個月。

2.1.3 乳膠微球免疫層析試驗(dlia)

基本原理:血清中抗血吸蟲抗體在毛細作用下經聚酯膜與乳膠標記的抗人igg單抗探針結合,繼續向前,在硝酸纖維素膜的檢測線(t線)被蟲卵抗原捕獲,出現紅色條帶。多餘的單抗探針向前則在質控線(c線)與羊抗鼠igg結合,出現紅色對照線。

操作方法:吸取血清2滴(50l),垂直滴加於乳膠層析血吸蟲抗體快速檢測卡加樣處,15min後觀察結果。

結果判斷:t線和c線均顯示紅色為陽性;僅c線顯示紅色為陰性。

注意事項:①檢測卡4℃~30℃乾燥儲存,恢復至室溫後1h內使用完畢;②c線未顯示表明檢測卡失效。

2.1.4 酶聯免疫吸附試驗(elisa)

基本原理:受檢血清中的特異性抗體在適宜條件下與載體的血吸蟲抗原相結合,形成抗原-抗體複合物。洗滌後加酶標記物,使與抗原-抗體複合物結合,然後加底物,由於酶的催化作用,使無色的底物顯色。

操作方法:①加待檢血清:血清用緩衝液(ph7.

4 pbs-tween20)稀釋成1:200,分別吸100μl加入吸附有抗原的反應板凹孔內,置溼盒內37℃溫育1h;②洗滌:甩乾反應板孔內的液體,用緩衝液注滿各孔,3min~5min後再甩乾孔內液體,如此反覆洗滌3次;③加酶結合物:

每孔加適宜稀釋的酶結合物100μl,置溼盒,同上法溫育和洗滌;④加底物:每孔加四甲基聯苯胺(tmb)或鄰苯二胺(opd)底物溶液100μl,置溼盒,溫育30min;⑤終止反應:每孔加入2mol/l硫酸(h2so4)50μl終止反應;⑥測定結果:

用elisa檢測儀測定,讀取450nm(tmb)/492 nm(opd)波長的消光值。

結果判斷:p/n值≥2.1倍判為陽性。

注意事項:①每塊反應板均應設陽性及陰性標準血清作對照;②反應板中的洗滌液甩乾後需立即加底物;③反應板儲存在4℃,標準血清、酶結合物冷凍儲存,酶結合物不宜反覆凍融。

2.2家畜血清學檢查可採用斑點金免疫滲濾試驗(l-digfa)或斑點酶標三聯試驗(deta)中的任1種方法。

2.2.1 斑點金免疫滲濾試驗(l-digfa)

基本原理:將膠體金標記在血吸蟲抗原上,形成抗原膠體金結合物,再與硝酸纖維素膜(nc)上吸附的抗血吸蟲抗體特異結合,在反應處發生金顆粒聚集,形成肉眼可見的紅色斑點。

操作方法:①待檢血清稀釋:吸取待檢血清0.

01ml,加生理鹽水0.79ml,搖勻成80倍稀釋的待檢血清;或血紙浸泡稀釋:用直徑0.

55cm打孔器裁取待檢血紙1片(0.24cm2),加生理鹽水0.5ml浸泡30min,搖勻即成待檢血紙浸出液;②用玻璃毛細管吸取稀釋的血清或血紙浸出液,點樣於反應板孔的nc上,每孔點2個樣品,點樣3min~4min後滴甲液(ph6.

47 0.01m pbs-bsa-tween20)封閉,每孔加1滴;③待甲液滲入nc後,滴乙液(金標記血吸蟲抗原)反應顯色,每孔加1滴;④待乙液滲入nc後,用丙液(蒸餾水)洗滌,每孔加1滴,觀察結果。

結果判定:紅色斑點判為陽性;淺粉紅色或黃色斑點判為陰性。

注意事項:①試劑4℃儲存,室溫平衡1h後使用;②血清稀釋液或血紙浸出液搖勻後取樣;③反應宜在20℃~28℃進行。

2.2.2 斑點酶標三聯試驗(deta)

基本原理:將日本血吸蟲、伊氏錐蟲、肝片吸蟲抗原點在硝酸纖維素膜上,製成三聯膜(下簡稱膜)。膜上抗原與被檢血樣中相應抗寄生蟲抗體結合,形成抗原-抗體複合物。

加兔抗牛igg,再加酶聯spa,形成抗原-抗體-酶聯spa複合物。加入底物,在酶的催化作用下,產生棕黃色斑點。

操作方法:①加血樣:將0.

24cm2待檢血紙及膜放入裝有1.5ml ph7.2 pbs-tween20的試管中,置37℃反應50min;②洗滌:

取出試管中的膜,放入洗滌器皿中,加洗滌液(ph7.2 pbs-tween20),洗滌3次,每次更換洗滌液,洗滌2min,最後去淨洗滌液;③加兔抗牛igg抗體(檢測豬血樣時省略):用濾紙吸乾膜表面水分,將膜放入裝有兔抗牛igg的器皿中,置37℃反應50min,同上法洗滌;④加酶聯spa:

用濾紙吸乾膜表面水分,將膜放入裝有酶聯spa的器皿中,置37℃孵育30min,同上法洗滌;⑤加底物:用濾紙吸乾膜表面水分,將膜放入裝有底物溶液(0.5mg/ml的3,3-二氨基聯苯胺液,加0.

01%h2o2)的器皿中,室溫反應1min~20min,待膜上出現任一清晰斑點後,用自來水反覆漂洗至水清,即可目測判斷結果。

結果判斷:無色為「-」淺黃色為「+」黃色為「+ 淺棕色為「+ 深棕色為以上判為陽性。

注意事項:①三聯膜、兔抗牛igg抗體、酶聯spa試劑,置-20℃可儲存10個月;②血紙應及時檢測,否則須密封、乾燥和低溫儲存。

3 病原學方法

採用糞便尼龍絹袋集卵孵化結合沉渣鏡檢法,一送三檢。

基本原理:用尼龍絹袋收集成熟蟲卵,在適宜的條件下卵內毛蚴活動增劇,不停地轉動,最終破殼而出,在上層水中游動,可在三角燒瓶頸部觀察到毛蚴。

操作方法:

① 驗收登記:驗看糞便的質量、數量及標籤。核對送檢名單無誤後,統一編號,然後在糞檢名冊上登記,並填寫3張標籤插入包糞紙中。

② 淋水沖洗:取3只三角燒瓶,在其頸部各套上1根橡皮筋,取糞包中的3張標籤,各折成寬約1cm的長條,夾在三角燒瓶頸部的橡皮筋中。取漏斗、壓舌板、銅絲篩各1個,取尼龍絹袋1只,下口用夾子夾住。

將重約90g的大便分為3等份,先取1份大便置於40目/25.4mm~60目/25.4mm銅篩中淋水調漿,通過漏斗使糞液濾入260目/25.

4mm的尼龍絹袋中,然後移去銅篩及漏斗,將漏斗用水洗後套在三角燒瓶上。繼續淋水沖洗袋內糞渣,用壓舌板或竹筷輕輕振盪尼龍絹袋,使加速過濾,直至濾出液變清為止。棄去尼龍絹袋下部夾子,將袋內的濾渣通過漏斗淋洗入三角燒瓶,加水滿至瓶頸,放入25℃~30℃孵化箱(室)孵化。

另2份大便再按上法分別淋水沖洗。

觀察毛蚴:一般需觀察3次,觀察時間隨溫度高低而不同。室溫在30℃以上時,第一次觀察可在孵化後1h,第二次在4h,第三次在8h。

室溫在26℃~30℃時,可在孵化後4h、8h和12h各觀察1次。室溫在20℃~25℃時,可在孵化後8h、12h和24h各觀察1次。如發現毛蚴,應用毛細吸管吸出,在顯微鏡下鑑定。

④ 沉渣鏡檢:在孵化前或後吸取糞便沉渣塗片鏡檢,每份樣本塗3片,檢查血吸蟲蟲卵及其它寄生蟲蟲卵。

結果判斷:發現血吸蟲毛蚴或蟲卵即判為陽性。

注意事項:①糞便必須新鮮、糞量每包90g,足量;②送檢糞便冬季不能超過24h,夏季不宜超過12h;③包糞紙張要潔淨,切勿用包過農藥、化肥或其它化學藥品的紙張;④孵化水要除去餘氯和水蟲;⑤防止交叉感染,一切用具每次使用後都要刷洗3次以上,清洗後用60℃~80℃的熱水浸泡滅卵;⑥觀察毛蚴時,應將燒瓶向光源,並襯以黑底板;⑦要注意毛蚴與水中原生動物的區別。

4 診斷標準

4.1 急性血吸蟲病

4.1.1 疑似病例應同時符合下列2條:①發病前2週至3個月有疫水接觸史;②發熱、肝臟腫大及周圍血液嗜酸性粒細胞增多為主要特徵,伴有肝區壓痛、脾腫大、咳嗽、腹脹及腹瀉等。

團風縣2023年查螺滅螺工作情況匯報

一 主要工作 一 查螺 完成查螺面積10000畝 實際釘螺面積18950畝 其中環境抽樣5400畝,系統抽樣4600畝。查出有螺面積2100畝,易感地帶800畝。查螺指標 調查釘螺13198框,有螺框154框 有螺框出現率1.167 活螺框138框 活螺框出現率1.046 捕獲釘螺323只,活螺30...

馬鞍山市2023年春季查滅螺工作計畫

2 湖陽血防組要在湖陽鄉內陸現有釘螺面積範圍內,擴大查螺範圍,查詢內陸陽性釘螺分布點 重點加強博望鎮朝陽村與石臼湖相通水系的內河 溝渠的螺情監測。3 江心血防組要重點監測江心鄉與外江相通的內陸溝渠螺情,同時在太白鎮振興村 尼山村的外河埂,向上 下游擴大查螺範圍。4 市轄區釘螺調查重點調查九華村江外灘...