一、實驗目的
了解鹽析分級分離蛋白質的基本原理及操作.
了解葡聚醣凝膠sephadexg-25分離蛋白質的基本原理和凝膠柱的製備及洗脫技術.
2、實驗原理
據研究結果分析每百克雞蛋含蛋白質12.8克，主要為卵白蛋白和卵球蛋白，還含有少量的卵粘蛋白、卵轉鐵蛋白、類卵粘蛋白、溶菌酶等，其中含有人體必需的8種氨基酸。本次實驗利用鹽析法和柱層析法分離和純化卵白蛋白和卵球蛋白。
鹽析的原理：蛋白質是親水膠體，在高濃度的中性鹽影響下脫去水化層，同時，蛋白質分子所帶的電荷被中和，結果蛋白質膠體的穩定性遭到破壞而沉澱析出。鹽析不同的蛋白質所需中性鹽濃度與蛋白質的種類及ph有關。
分子量大的蛋白質(球蛋白)比分子量小(白蛋白)易析出。改變鹽濃度，使不同分子量的蛋白質分別析出。
脫鹽的原理：含鹽蛋白質溶液流經凝膠層析柱時，小分子量的鹽分子因進入凝膠的篩孔中，向下移動的速度較慢；而大分子的蛋白質不能進入凝膠的篩孔，以較快的速度流過凝膠柱，從而使蛋白質與鹽分開。g-25:
1000---5000；g-50:1500---30000；g-75:3000---80000
三、實驗用品
儀器：752型紫外可見分光光度計、離心機、層析裝置
器皿：5ml試管20支、50ml燒杯2個、試管架、玻棒、石英比色皿、玻璃層析柱
藥品及材料：新鮮蛋清、固體硫酸銨、飽和硫酸銨溶液、凝膠sephadexg-25
飽和硫酸銨溶液：稱固體硫酸銨(分析純)850g，置於1000ml蒸餾水中，在70-80℃水溫中攪拌溶解。將酸度調節至ph7.
2，室溫中放置過夜，瓶底析出白色結晶，上清液即為飽和硫酸銨溶液。
四、實驗步驟
1、卵清蛋白與卵球蛋白的分離
取卵清2ml於試管中；加2ml的半飽和硫酸銨溶液，攪拌均勻，靜置2分鐘；3000r/min,離心5分鐘；沉澱為卵球蛋白(m130000)，加蒸餾水定容至4ml溶液。
取上清液，加入固體硫酸銨（計算4ml溶液飽和度由50%變化為100%需要加入硫酸銨的克數1.57g）；3000r/min，離心5分鐘；沉澱為卵清白蛋白(m43000)，加蒸餾水定容至4ml溶液。
2、 凝膠柱層析（重點講解，不安排做試驗）
(1) 凝膠柱的準備：sephadexg-25沸水溶脹30分鐘，傾瀉法傾去懸浮的小顆粒，溼裝法裝柱。
(2) 加樣和洗脫：先將柱內液體用滴管輕輕吸去，使液面下降到剛與凝膠表面相切，用槍吸取1ml樣液沿著管壁加入柱子上方，再加3ml蒸餾水，開始脫鹽，每管收集2ml共15管。
(3)收集和測定：280nm紫外吸收測定蛋白質含量或者用考馬斯亮藍法在在595nm波長測吸光度值。
(4)以洗脫體積為橫座標，吸光值為縱座標,繪製洗脫曲線，將蛋白質溶液收集待用。
（5）將每管的洗脫液取出1ml，加入幾滴bacl2溶液，觀察是否有沉澱，以此判斷脫鹽是否完全。
5、資料結果與分析
（1）資料記錄與分析
（2）繪製洗脫曲線
黃瓜雞蛋清面膜的做法
如對您有幫助，可購買打賞，謝謝 導語 在日常的生活當中，已經不足為奇大多數市面上賣的一些 對於 傷害比較大，而且的 特別多，總是讓人用著非常不放心，那麼接下 在日常的生活當中，已經不足為奇大多數市面上賣的一些 對於 傷害比較大，而且的 特別多，總是讓人用著非常不放心，那麼接下來的文章我就來介紹一下，...
雞蛋清衛生紙去黑頭怎麼樣
雞蛋清在去除黑頭方面的效果是不錯的，我們知道黑頭給人感覺特別油膩，嚴重的影響了面部的美容，所以說及時的去除黑頭是非常有必要的，去除黑頭的方法也比較多，其中雞蛋清具有深層護理的作用，能夠清除 毛孔的一些髒東西，在去除黑頭方面的作用也很好，但是也要注意，在使用完以後一定要及時用清水清理面部。雞蛋清去 黑...
去除妊娠紋的方法雞蛋清可消除妊娠紋
去除妊娠紋的簡單方法有哪些？怎麼才可以去除妊娠紋？雞蛋是我們日常生活中非常熟悉的食品，營養豐富，煎炒蒸煮樣樣都行。其實，除了作為食物，雞蛋還具有獨特的藥用價值。去除妊娠紋就是它的作用之一，是各美女性的福音。這無疑是妊娠紋成了產後女人美麗的殺手，而雞蛋就有去除妊娠紋的作用。一 雞蛋清的作用 雞蛋清甘寒...